石杉堿甲殼聚糖微球的研究.pdf

1、目的：阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease簡稱AD)是一種以記憶與認(rèn)知功能為主要障礙的退行性病變，成為導(dǎo)致老年性癡呆的主要類型之一，嚴(yán)重威脅著人類的健康與生命。石杉堿甲(Huperzine A，Hup-A)是從蛇足石杉中分離的一種生物堿，是我國首創(chuàng)的強(qiáng)效可逆性乙酰膽堿酯酶抑制劑，通過抑制腦內(nèi)乙酰膽堿酯酶活性，提高腦內(nèi)乙酰膽堿水平而發(fā)揮作用，是目前治療AD最有效的藥物之一?，F(xiàn)有Hup—A制劑缺乏腦選擇性，由于抑制外周膽堿酯

2、酶活性導(dǎo)致用藥者產(chǎn)生較大毒副作用。研究新型Hup-A制劑以提高其腦內(nèi)濃度增強(qiáng)治療效果并降低毒副作用，對臨床治療AD將有重要意義。 鼻腔給藥不僅具有給藥方便、吸收迅速、無首過效應(yīng)等優(yōu)點，且可達(dá)到腦靶向治療的目的，是近年來國內(nèi)外藥劑學(xué)前沿領(lǐng)域研究的熱點之一。本課題采用現(xiàn)代藥物制劑技術(shù)，選用Hup—A為模型藥物，以殼聚糖微球為載體，制成腦靶向Hup—A殼聚糖微球鼻黏膜給藥系統(tǒng)，具有很高的科學(xué)技術(shù)價值和臨床應(yīng)用前景。 方法：建立

3、石杉堿甲的體外測定方法；采用乳化交聯(lián)固化法制備石杉堿甲殼聚糖微球，在單因素考察的基礎(chǔ)上，以微球粒徑分布、載藥量、包封率為綜合評價指標(biāo)，采用正交試驗設(shè)計、優(yōu)化篩選最佳處方與制備工藝：采用掃描電鏡及光學(xué)顯微鏡進(jìn)行微球外觀形態(tài)、粒徑與粒度分布研究；通過體外釋藥動力學(xué)研究，考察微球的釋藥行為，得出相符的數(shù)學(xué)模型及參數(shù)，探索微球釋藥機(jī)理，并進(jìn)行微球的初步穩(wěn)定性研究。 選用蟾蜍為動物試驗?zāi)Ｐ停瑢κ級A甲殼聚糖微球進(jìn)行黏膜黏附性和纖毛毒性考察

4、。選用大鼠為試驗動物，以石杉堿甲溶液靜脈注射作對照，鼻腔給予石杉堿甲殼聚糖微球，進(jìn)行體內(nèi)藥物動力學(xué)和腦靶向分布動力學(xué)研究。采用高效液相色譜熒光檢測法測定血漿中藥物濃度，以DAS軟件進(jìn)行藥物動力學(xué)數(shù)據(jù)處理，求得主要藥動學(xué)參數(shù)，計算石杉堿甲殼聚糖微球鼻腔給藥的絕對生物利用度。采用腦組織勻漿法，測定腦部石杉堿甲含量，以腦靶向性指數(shù)(drug targeting index DTI)和腦部藥物直接轉(zhuǎn)運百分比(brain drug directt

5、ransport percentage DTP)作為評價指標(biāo)，評價石杉堿甲殼聚糖微球鼻腔給藥的腦靶向性。 結(jié)果：通過對處方和制備工藝的單因素考察，發(fā)現(xiàn)殼聚糖濃度、分散攪拌速度對殼聚糖微球的形態(tài)及粒徑分布影響較大；甲醛用量和固化時間對殼聚糖微球的包封率影響較大。選擇殼聚糖濃度、攪拌速度、固化時間和甲醛用量進(jìn)行四因素三水平正交優(yōu)化，篩選最佳處方與制備工藝，結(jié)果為殼聚糖濃度3％，攪拌速度1200 r/min，固化時間2小時，甲醛用量1

6、ml。按優(yōu)化最佳處方和工藝制備三批微球，結(jié)果表明該處方合理，制備工藝穩(wěn)定，重現(xiàn)性良好。 按優(yōu)化處方和工藝制成的石杉堿甲殼聚糖微球外觀圓整，平均粒徑為42.4±0.9μm，體外釋放研究結(jié)果表明：釋藥行為符合Higuchi數(shù)字模型；黏膜黏附性實驗結(jié)果表明殼聚糖微球的纖毛輸送速率為2.54±0.47 mm/min。蟾蜍上顎給予殼聚糖微球后，纖毛持續(xù)擺動時間與生理鹽水組相比略有下降，但不影響其用于鼻腔給藥。影響因素實驗表明石杉堿甲殼聚糖

7、微球?qū)?、熱、濕不敏感，室溫放?個月，各項指標(biāo)變化不明顯，表明其具有較好的穩(wěn)定性。 采用高效液相色譜熒光檢測法測定血漿和腦組織勻漿中石杉堿甲，方法靈敏可靠，最低定量限為2 ng/ml，在2～120 ng/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。以大鼠為試驗動物，以靜脈注射石杉堿甲溶液作對照，鼻腔給予石杉堿甲殼聚糖微球，體內(nèi)實驗藥物動力學(xué)結(jié)果表明，血漿半衰期由1.35 h延長至2.05h；腦組織半衰期由2.18h延長至3.33h；微球鼻黏膜

8、給藥后絕對生物利用度達(dá)76.48％；血漿AUC<,(0→8h)>為靜脈注射的0.76倍，但腦組織AUC<,(0→8h)>為靜脈注射的1.36倍；腦靶向性實驗結(jié)果表明，鼻腔給藥后DTI是靜脈注射給藥的1.78倍，DTP為43.96％。本實驗證明石杉堿甲殼聚糖微球鼻腔給藥后具有一定的腦靶向性，腦部有43.96％的石杉堿甲通過繞過血-腦脊液屏障方式轉(zhuǎn)運，即有一部藥物通過鼻腔和腦部的直接通路避開血-腦脊液屏障入腦。 結(jié)論：本課題采用“正