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文檔簡介
1、目的:觀察轉染ADAM17-shRNA的大鼠骨髓間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cell, BMSC)與MCF-7乳腺癌細胞混合培養(yǎng)后,對MCF-7增殖能力以及侵襲能力的影響。旨在探究新的ADAM17-shRNA給予方式,為以ADAM17為靶點的乳腺癌靶向治療提供新的方法。
方法:設計4個針對 ADAM17以重組慢病毒為載體的shRNA,將其分別轉染入MCF-7人乳腺癌細胞中,通過 re
2、al-time PCR檢測 mRNA,篩選出對 ADAM17表達的干擾率最佳的shRNA。體外培養(yǎng)SD大鼠的BMSC,用篩選出的shRNA轉染BMSC細胞,將轉染后的BMSC與MCF-7細胞共培養(yǎng),用real-time PCR方法檢測共培養(yǎng)后 ADAM17mRNA的表達,用 transwell侵襲實驗檢測 MCF-7的侵襲能力,用MTT法檢測MCF-7的增殖能力。
結果:Realtime PCR方法篩選出的shRNA-has-
3、1658可顯著抑制 MCF-7細胞ADAM17mRNA的表達。Realtime PCR檢測共培養(yǎng)后ADAM17mRNA的表達,將對照組的ADAM17mRNA相對表達水平設為100%,轉染組的ADAM17mRNA的水平明顯低于對照組,轉染組與對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義。體外侵襲實驗顯示對照組和無意義序列組 MCF-7細胞到達下室的細胞數(shù)量明顯多于轉染組,轉染組與對照組比較,差異具有統(tǒng)計學意義。MTT實驗顯示,轉染組和對照組相比,轉染組細
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