酒精致PC12細(xì)胞自噬的研究.pdf

1、目的：探討酒精誘導(dǎo)大鼠嗜鉻神經(jīng)瘤細(xì)胞PC12自噬和凋亡中相關(guān)的分子機(jī)制以及關(guān)系，以揭示酒精的神經(jīng)毒性作用，并為酒精致神經(jīng)細(xì)胞損傷的修復(fù)提供新的理論思路與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：將PC12細(xì)胞分為5組：對(duì)照組、去血清組、50mmol·L-1酒精處理組、100mmol·L-1酒精處理組和200mmol·L-1酒精處理組。MTT法確定酒精對(duì)細(xì)胞增殖的抑制濃度范圍；Hoechst33258染色檢測(cè)細(xì)胞的凋亡的形態(tài)學(xué)變化、免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞

2、的自噬現(xiàn)象；透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞自噬的超微結(jié)構(gòu)；通過高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡和壞死率以及自噬率；Western-blotting檢測(cè)細(xì)胞凋亡和自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：MTT法檢測(cè)酒精對(duì)大鼠嗜鉻神經(jīng)瘤細(xì)胞PC12增殖有抑制作用。酒精濃度在100mmol·L-1到400mmol·L-1之間時(shí)具有明顯的抑制作用。Hoechst熒光染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，發(fā)現(xiàn)胞體皺縮、細(xì)胞染色質(zhì)凝集、細(xì)胞核碎裂等典型細(xì)胞凋亡特

3、征性變化。LC3免疫熒光染色檢測(cè)自噬體數(shù)量，結(jié)果顯示自噬體數(shù)量變化與濃度呈正相關(guān)性，與時(shí)間呈負(fù)相關(guān)性。酒精作用細(xì)胞2h時(shí)，自噬體數(shù)量最多。透射電子顯微鏡下可見典型的自噬泡存在。高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)檢測(cè)酒精誘導(dǎo)的PC12的凋亡率與酒精濃度和時(shí)間均呈正相關(guān)性；而自噬率與酒精濃度呈正相關(guān)性，與酒精作用時(shí)間呈負(fù)相關(guān)性。Western-blotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在不同濃度的酒精誘導(dǎo)下LC3、Beclin-1、Bcl-2和p53蛋白表達(dá)量均高于正常