酒精誘導(dǎo)PC12細(xì)胞自噬及其與P62作用的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　采用不同濃度酒精作用于大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(PC12細(xì)胞),觀察細(xì)胞自噬發(fā)生及其與P62變化的關(guān)系。
　　方法：
　　用四甲偶氮唑鹽比色法(MTT)觀察酒精對PC12細(xì)胞生存率的影響;間接免疫熒光法檢測細(xì)胞自噬標(biāo)志性蛋白LC3和P62的變化;高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)檢測細(xì)胞LC3熒光強度;透射電鏡檢測細(xì)胞自噬的超微結(jié)構(gòu);Western blotting方法檢測P62蛋白量的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　10

2、0mmol/L、200mmol/L、400mmol/L和800mmol/L濃度酒精處理PC12細(xì)胞24h,與0 mmol/L酒精組比較,PC12細(xì)胞生存率分別為91.97％(P<0.05)、72.63%(P<0.01)、58.23%(P<0.01)、50.82%(P<0.01),酒精對PC12細(xì)胞的增殖有顯著的抑制作用,呈濃度依賴性。間接免疫熒光檢測到酒精致PC12細(xì)胞自噬標(biāo)志性蛋白LC3在細(xì)胞核周圍密度增高,并與 P62形成點狀聚集共

3、定位;高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)檢測到酒精濃度為200mmol/L作用2h時,PC12細(xì)胞LC3自噬熒光強度最高;透射電鏡也觀察到酒精作用的PC12細(xì)胞質(zhì)中自噬體和自噬溶酶體。Western blotting結(jié)果顯示,不同濃度酒精處理PC12細(xì)胞2h,P62蛋白表達(dá)量顯著增加(P<0.01);用200mmol/L濃度酒精處理PC12細(xì)胞,P62蛋白表達(dá)在2h達(dá)到最高值。
　　結(jié)論：
　　酒精誘導(dǎo)PC12細(xì)胞的發(fā)生自噬現(xiàn)象,P62蛋