Sp1圈套寡核苷酸抑制NIH3T3細(xì)胞增殖和Ⅰ型膠原基因表達(dá).pdf

1、目的:研究針對(duì)轉(zhuǎn)錄因子Sp1的圈套寡脫氧核苷酸(decoy ODN)對(duì)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（NIH3T3）細(xì)胞增殖和Ⅰ型膠原前α1、α2基因表達(dá)的影響，探討病理性疤痕的基因治療。 方法:體外設(shè)計(jì)合成針對(duì)轉(zhuǎn)錄因子Sp1的特異性啞鈴形decoyODN。用陽(yáng)離子轉(zhuǎn)染試劑JetPEI將ODN轉(zhuǎn)染入NIH3T3細(xì)胞。分別用流式細(xì)胞儀檢測(cè)ODN轉(zhuǎn)染效率，激光共聚焦顯微鏡觀察ODN在細(xì)胞中的分布，電泳遷移率變動(dòng)分析(EMSA)驗(yàn)證ODN與Sp1

2、的特異性結(jié)合。用WST-8檢測(cè)ODN對(duì)細(xì)胞增殖的影響。用半定量PCR和熒光定量PCR檢測(cè)ODN對(duì)細(xì)胞Ⅰ型膠原前α1、α2基因表達(dá)的抑制作用。 結(jié)果:轉(zhuǎn)染試劑JetPEI可將啞鈴形Sp1 decoy ODN高效轉(zhuǎn)染進(jìn)入NIH3T3細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率達(dá)99.24％；激光共聚焦顯微鏡顯示進(jìn)入細(xì)胞的ODN呈現(xiàn)明顯的時(shí)空分布，在轉(zhuǎn)染后12h，Sp1 decoy ODN幾乎全部進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)；EMSA 實(shí)驗(yàn)證明Sp1 decoy ODN能與蛋白特