尼莫地平對大鼠皮質(zhì)受損區(qū)域Calpain、P25、Psd-95-NR2B的影響及其與細(xì)胞凋亡的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　本實驗采用Feeney's自由落體模型制作大鼠顱腦損傷模型(Trauma Braininjure，TBI)并進(jìn)行檢測尼莫地平對運動損傷治療的影響。觀察其對大鼠顱腦損傷的病理形態(tài)、細(xì)胞凋亡和損傷模型的關(guān)鍵基因Calpain，P25和Psd-95/NR2B復(fù)合物表達(dá)對運動損傷的影響，深入探討尼莫地平治療顱腦損傷的分子機制及創(chuàng)傷性腦損傷可能的部分發(fā)病機制，以期為顱腦損傷臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　用H

2、E染色或免疫組化的方法檢測創(chuàng)傷性腦損傷后受損腦皮質(zhì)區(qū)域中的細(xì)胞形態(tài)變化和Calpain、Psd-95的表達(dá)情況。用TUNEL的方法檢測該區(qū)域神經(jīng)細(xì)胞的凋亡情況。用免疫共沉淀的方法鑒定Psd-95復(fù)合體中Psd-95和NR2B蛋白互作情況。用WesternBlotting的方法檢測蛋白P25及Calpain時序表達(dá)水平變化的情況。
　　結(jié)果:
　　1顱腦損傷后造模組運動功能評分的均值為3.083±0.46?？瞻捉M運動功能評分的

3、均值為0.125±0.34，幾乎沒有神經(jīng)損傷。尼莫地平組運動功能評分的均值為2.042±0.5。兩組進(jìn)行配對的t檢驗發(fā)現(xiàn):兩兩P＜0.001。
　　2 HE染色比較三組的腦皮質(zhì)區(qū)域的細(xì)胞形態(tài)差異，運動功能評分越高，細(xì)胞間隙越大，細(xì)胞核越致密，線粒體腫脹得越嚴(yán)重，細(xì)胞的損傷也就越嚴(yán)重。
　　3尼莫地平組與造模組的Calpain的免疫組化結(jié)果，后者顯示更多的棕色陽性細(xì)胞。WestemBlotting結(jié)果顯示尼莫地平組Calpai

4、n和P25在1d后隨時間的增加蛋白表達(dá)量減少。TUNEL實驗表明該組的AI％數(shù)值也在1d后隨時間的增加而減少。
　　4通過免疫共沉淀的方法在運動功能評分4的樣本鑒定了Psd-95和NR2B是互作的。免疫組化的實驗也說明運動功能評分越高，檢測到的棕色陽性細(xì)胞越多。免疫組化的實驗的表達(dá)水平分析表明:Psd-95在對照組表達(dá)水平基本衡定，在尼莫地平組和造模組中隨時間的推移表達(dá)量增加，尼莫地平組在損傷后的1d、2d及3d時間點Psd-95

5、的表達(dá)量都比造模組顯著降低。在造模組，Psd-95免疫組化結(jié)果和造模組細(xì)胞TUNEL結(jié)果成很好的正相關(guān)性（r=0.88，P＜0.05）。在尼莫地平組和造模組，運動功能評分與AI凋亡指數(shù)成正相關(guān)性（rs=0.96，P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1從動物實驗和形態(tài)觀察以及統(tǒng)計分析可發(fā)現(xiàn):尼莫地平對運動損傷具有治療效應(yīng)。
　　2 HE染色結(jié)果和細(xì)胞凋亡AI結(jié)果表明尼莫地平對損傷的區(qū)域也有阻止進(jìn)入凋亡的藥理作用。