雌激素對β淀粉樣蛋白（25-35）誘導(dǎo)的大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、背景:已有流行病學(xué)研究及臨床試驗表明雌激素對阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)具有防治作用,基礎(chǔ)試驗也表明雌激素對中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能具有廣泛和重要的作用,它不僅可以調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌和生殖功能,而且對AD等一些神經(jīng)退行性疾病有直接的保護(hù)效應(yīng),但目前證據(jù)仍不充分,機(jī)制也并未完全闡明.目的:研究雌激素是否可以抑制β淀粉樣蛋白(β-amyloid protein,Aβ)誘導(dǎo)的大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡,研究此效應(yīng)是否通過調(diào)節(jié)抗凋亡分

2、子Bcl-2(B-cell leukemia/lymphoma 2)及線粒體途徑中凋亡體成分凋亡蛋白酶活化因子1(apoptotic protease activating factor 1,Apaf-1)的表達(dá)來介導(dǎo),研究雌激素受體阻滯劑他莫昔芬(tamoxifen,TMX)對雌激素效應(yīng)的影響,探討雌激素神經(jīng)保護(hù)功能和機(jī)制,為臨床上雌激素替代治療(estrogen replacement therapy,ERT)對一些神經(jīng)退行性疾病如

3、AD的防治作用提供更多依據(jù),有助于ERT的進(jìn)一步拓展.方法:取新生24h內(nèi)SD大鼠的大腦皮質(zhì)進(jìn)行分離和體外原代培養(yǎng),用神經(jīng)特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)記鑒定神經(jīng)元.用Aβ(25-35)25μmol/L處理大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞24小時,與空白對照組相比觀察Aβ(25-35)對原代培養(yǎng)的大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的影響.0nmol/L,lnmol/L和30nmol/L 17β-雌二醇(

4、17β-estradiol,17β-E2)聯(lián)合或不聯(lián)合1μmol/L的雌激素受體拮抗劑TMX預(yù)處理大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞48小時,再將神經(jīng)元細(xì)胞暴露于25μmol/LAβ(25-35)中24小時,觀察17β-E2及TMX對Aβ(25-35)誘導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的影響.用相差倒置顯微鏡、Giemsa染色及Hochest33258熒光染色觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化,測定乳酸脫氫酶(1actate dehydrohenase,LDH)釋放率表示細(xì)胞

5、的死亡率,用Hochest33258熒光染色及AnnexinV/PI雙染色流式細(xì)胞術(shù)兩種方法檢測細(xì)胞凋亡率,用半定量RT-PCR方法檢測Bcl-2及Apaf-1在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá).結(jié)果:25μmol/LAβ(25-35)可以誘導(dǎo)大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞損傷及凋亡,下調(diào)抗凋亡分子Bcl-2的表達(dá)及上調(diào)凋亡體成分Apaf-1的表達(dá).1nmol/L和30nmol/L 17β-E2預(yù)處理48小時顯著抑制Aβ(25-35)誘導(dǎo)的大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞損傷和凋

6、亡的作用,并且顯著抑制Aβ(25-35)下調(diào)Bcl-2及上調(diào)Apaf-1的表達(dá)的作用.1μmol/L雌激素受體阻滯劑TMX單用時對Aβ(25-35)誘導(dǎo)的大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡無影響,與17β-E2聯(lián)合使用可以部分阻斷雌激素抑制神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的效應(yīng),完全阻斷雌激素上調(diào)抗凋亡分子Bcl-2的表達(dá)及部分阻斷雌激素下調(diào)Apaf-1的表達(dá).1nmol/L和30nmol/L17β-E2的神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)無顯著差別.結(jié)論:1.Aβ可以通過下調(diào)抗凋亡分子B

7、cl-2及上調(diào)線粒體途徑中凋亡體的組成成分Apaf-1的表達(dá)誘導(dǎo)原代培養(yǎng)的大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡.2.雌激素可以通過上調(diào)抗凋亡分子Bcl-2的表達(dá),下調(diào)線粒體途徑中凋亡體的組成成分Apaf-1的表達(dá),從而阻斷Aβ誘導(dǎo)的線粒體凋亡途徑來抑制Aβ誘導(dǎo)的大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡.3.雌激素抑制Aβ誘導(dǎo)的大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的效應(yīng)部分由雌激素受體介導(dǎo).雌激素上調(diào)抗凋亡分子Bcl-2的表達(dá)可能完全通過雌激素受體途徑,而下調(diào)Apaf-1的表達(dá)只部分