阿司匹林對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)神經(jīng)元炎性損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、阿爾茨海默?。ˋlzheimer's Disease，AD）的主要臨床特征為進(jìn)行性認(rèn)知功能下降，通常最初為近期記憶丟失，隨后影響到所有智力功能，嚴(yán)重者可導(dǎo)致生活基本功能完全喪失和過(guò)早死亡。細(xì)胞外β淀粉樣蛋白(βamyloid protein，Aβ)沉積、細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles，NFT)和引起神經(jīng)元死亡的炎性反應(yīng)是AD的主要病理特征。由于老齡化危機(jī)，AD的患病率在全世界范圍內(nèi)都將增加，并將對(duì)社

2、會(huì)產(chǎn)生沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。神經(jīng)元功能障礙和死亡是AD出現(xiàn)一系列癥狀的原因，然而現(xiàn)有的藥物治療措施并不能減緩或阻止這一病理改變，AD仍是一種不可治愈的疾病。因此，探索一種經(jīng)濟(jì)有效的防治藥物具有重要意義。
　　AD的發(fā)生發(fā)展與神經(jīng)系統(tǒng)炎性反應(yīng)密切相關(guān)。炎性因子腫瘤壞死因子α(tumornecrosis factorα，TNF-α)和白細(xì)胞介素1β(interleukin1β，IL-1β)均具有神經(jīng)毒性作用，可影響神經(jīng)突觸的傳遞功能。TNF

3、-α和IL-1β也是核因子κB(nuclear factorkappa B，NF-κB)最有效的刺激因子。激活的NF-κB可繼續(xù)誘導(dǎo)TNF-α、IL-1β、Toll樣受體和脂多糖等細(xì)胞因子表達(dá)，形成慢性炎性反應(yīng)的惡性循環(huán)。
　　臨床資料顯示，服用阿司匹林(aspirin，Asp)的人群AD患病率較未服用者明顯減少。鑒于Asp具有抗炎作用，推測(cè)其降低AD的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)可能與抗炎作用有關(guān)。本研究使用Aβ制造AD神經(jīng)損傷模型，通過(guò)ASP的干

4、預(yù)來(lái)探究其對(duì)神經(jīng)炎性反應(yīng)中TNF-α和IL-1β含量以及NF-κB/p65和磷酸化核因子κB抑制蛋白α(phosphorylated inhibitor proteinαof nuclear factor kappa B，pIκB-α)表達(dá)的影響及其作用機(jī)制，以期能為AD的治療提供新方法。
　　目的：神經(jīng)系統(tǒng)炎性反應(yīng)在AD的進(jìn)程中起到重要作用，本研究通過(guò)使用Aβ來(lái)建立AD神經(jīng)損傷細(xì)胞模型，在Asp干預(yù)后觀察其對(duì)神經(jīng)炎性反應(yīng)中TNF

5、-α和IL-1β含量以及NF-κB/p65核蛋白和pIκB-α總蛋白表達(dá)的影響，探討NF-κB通路在此過(guò)程中的作用和Asp在AD臨床治療中的意義。
　　方法：(1)取孕17～18d胎鼠海馬，經(jīng)過(guò)剪碎、消化、離心和吹打過(guò)濾后接種培養(yǎng);(2)觀察并記錄第2、3、4、5天神經(jīng)元生長(zhǎng)狀況，并于第7天用神經(jīng)元特異性烯醇化酶熒光染色法鑒定神經(jīng)元，計(jì)算其純度。(3)將培養(yǎng)至第7天的神經(jīng)元隨機(jī)分為4組:①Aβ組:加入終濃度為20μmol/L的Aβ

6、;②低劑量Asp組:加入終濃度為50μmol/L的Asp和20μmol/L的Aβ;③高劑量Asp組:加入終濃度為100μmol/L的Asp和20μmol/L的Aβ;④空白對(duì)照組:加入等量維持培養(yǎng)基。繼續(xù)培養(yǎng)48h后，采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定上清液中TNF-α和IL-1β含量，WsternBlotting法檢測(cè)NF-κB/p65核蛋白和pIκ B-α總蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：(1)與對(duì)照組比較，Aβ組TNF-α和IL-1β含

7、量最高(P＜0.01)，其次為低劑量Asp組(P＜0.01)和高劑量Asp組(P=0.02和P＜0.01);Aββ組NF-κB/p65核蛋白和pIκ B-α總蛋白的表達(dá)水平也明顯升高(P＜0.01)，低劑量Asp組NF-κB/p65核蛋白表達(dá)水平稍有升高(P=0.01)，pIκ B-α總蛋白表達(dá)水平比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.61);高劑量Asp組NF-κB/p65核蛋白和pIκ B-α總蛋白表達(dá)水平均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P值分別為0.13和0

8、.77）。(2)與Aβ組比較，低劑量Asp組TNF-α和IL-1β含量均降低(P＜0.01)，NF-κB/p65核蛋白和pIκ B-α總蛋白表達(dá)水平也明顯降低(P＜0.01);高劑量Asp組TNF-α和IL-1β含量也明顯降低(P＜0.01)，NF-κB/p65核蛋白和pIκ B-α總蛋白表達(dá)水平也顯著減少(P＜0.01)。(3)低劑量和高劑量Asp組兩組TNF-α和IL-1β含量以及NF-κB/p65核蛋白和pIκB-α總蛋白表達(dá)水平

9、比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值分別為0.36、0.58、0.19和0.82)。
　　結(jié)論：Aβ組TNF-α和IL-1β含量均明顯升高，NF-κB/p65核蛋白和pIκB-α總蛋白表達(dá)水平也明顯升高，提示Aβ組炎性反應(yīng)較為明顯，且NF-κB被激活并進(jìn)入核內(nèi);低劑量和高劑量Asp組TNF-α和IL-1β含量均降低，NF-κB/p65核蛋白和pIκB-α總蛋白表達(dá)水平也偏低，提示低劑量和高劑量Asp組炎性反應(yīng)受到抑制，且NF-κB的激活受到抑