胰島素對(duì)Aβ25-35損傷的神經(jīng)元的保護(hù)作用.pdf

1、背景和目的:
　　進(jìn)入21世紀(jì)以來(lái)，我國(guó)老齡化社會(huì)的步伐進(jìn)一步加快，伴隨而來(lái)的老年慢性疾病——阿爾茨海默病的發(fā)病率日益上升，成為繼心腦血管疾病之后又一嚴(yán)重危害老年人身心健康的常見(jiàn)疾病，引起了社會(huì)的廣泛關(guān)注。阿爾茨海默病（Alzheimer's disease，AD）是一種較為常見(jiàn)的進(jìn)行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，常見(jiàn)臨床表現(xiàn)為記憶力進(jìn)行性下降、認(rèn)知功能障礙以及人格改變和情感障礙等。患者發(fā)病初期以近記憶力下降為突出表現(xiàn)，后期可完全喪失

2、社交能力和自理能力，甚至可能并發(fā)呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)等其他全身系統(tǒng)疾病的癥狀，給家庭、國(guó)家和社會(huì)帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和心理負(fù)擔(dān)。
　　阿爾茨海默病患者的認(rèn)知功能衰退是不可逆的，而其發(fā)病機(jī)制尚不明確，學(xué)說(shuō)眾多，影響最廣泛的是β淀粉樣蛋白學(xué)說(shuō)。AD的治療目前尚無(wú)特異性療法，只能給予對(duì)癥治療延緩病程的發(fā)展。近些年來(lái)的流行病學(xué)資料提示糖尿病與AD的發(fā)病存在著某種聯(lián)系:糖尿病患者患AD風(fēng)險(xiǎn)較非糖尿病患者明顯升高[1]。隨著糖年病學(xué)家和神經(jīng)學(xué)家

3、對(duì)二者發(fā)病機(jī)制的探索發(fā)現(xiàn):AD患者存在著中樞性胰島素抵抗[1]。因此胰島素信號(hào)通路與AD發(fā)病的關(guān)系也成為學(xué)者們研究的熱點(diǎn)。
　　神經(jīng)元是神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能基本單位之一，由細(xì)胞體和細(xì)胞突起兩部分組成。依據(jù)形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的不同，細(xì)胞突起又可分為樹(shù)突和軸突。樹(shù)突表面的許多棘狀突起被稱為樹(shù)突棘，是形成突觸的部位，也是神經(jīng)元接收信號(hào)的部位，與學(xué)習(xí)記憶的形成和神經(jīng)系統(tǒng)疾病密切相關(guān)[2]。樹(shù)突的分支和樹(shù)突棘可擴(kuò)大神經(jīng)元接受神經(jīng)沖動(dòng)的表面積。

4、因此神經(jīng)元及其樹(shù)突分支對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)正常行使其功能起著至關(guān)重要的作用。本實(shí)驗(yàn)擬用Aβ25-35終濃度為20μmol·L-1的培養(yǎng)液孵育海馬神經(jīng)元24h制作AD細(xì)胞模型，用含有胰島素的培養(yǎng)液干預(yù)，觀察胰島素對(duì)Aβ?lián)p傷的神經(jīng)元及其樹(shù)突分支的保護(hù)作用。
　　材料與方法:
　　將體外原代培養(yǎng)7天的大鼠海馬神經(jīng)元隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、不同濃度胰島素預(yù)處理組?？瞻讓?duì)照組用Neurobasal培養(yǎng)液培養(yǎng);模型組加入終濃度為20μmo

5、l·L-1的Aβ25-35孵育24h建立AD細(xì)胞模型;不同濃度胰島素預(yù)處理組在加入Aβ25-35之前用胰島素濃度終濃度分別為0.1MU·L-1、0.5MU·L-1、1MU·L-1、2MU·L-1的Neurobasal培養(yǎng)液預(yù)孵育4h。各組細(xì)胞在進(jìn)行上述處理之后，通過(guò)MTS法測(cè)試各組細(xì)胞活力并統(tǒng)計(jì)存活率，用MDA試劑盒和SOD試劑盒測(cè)試MDA含量、SOD活性，通過(guò)腺病毒轉(zhuǎn)染神經(jīng)元觀察細(xì)胞樹(shù)突總長(zhǎng)度(TDBL)及一級(jí)樹(shù)突數(shù)目(PDN)。

6、r>　　結(jié)果:
　　1.MTS法檢測(cè)細(xì)胞活力及細(xì)胞存活率:與空白對(duì)照組相比，Aβ組細(xì)胞活力明顯下降，存活率下降;與Aβ組相比，Aβ+胰島素(0.1，0.5，1MU·L-1)組細(xì)胞活力上升，存活率上升至，而Aβ+胰島素(2MU/L)組細(xì)胞活力下降。細(xì)胞存活率下降，甚至低于Aβ組(P＜0.05)。
　　2.MDA含量、SOD活性測(cè)定:與空白對(duì)照組相比，Aβ組細(xì)胞SOD明顯下降，MDA含量明顯增加;與Aβ組相比，Aβ+胰島素(0.

7、1，0.5，1MU·L-1)組SOD上升、MDA下降，Aβ+胰島素(2MU/L)組SOD下降、MDA含量上升(P＜0.05)。
　　3.神經(jīng)元樹(shù)突觀察:Aβ組TDBL和PDN較空白對(duì)照組明顯減少(P＜0.05);Aβ+胰島素(0.1，0.5，1MU·L-1)組TDBL、PDN較Aβ組均增加(P＜0.05);而Aβ+胰島素(2MU/L)組TDBL反而較Aβ組減少(P＜0.05)，PDN較Aβ組減少(P＞0.05)。
　　結(jié)論: