心肌營養(yǎng)素-1對谷氨酸致海馬神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：建立谷氨酸所致海馬神經(jīng)元損傷模型，觀察重組腺病毒-心肌營養(yǎng)素1(Adv-CT1)對損傷神經(jīng)元存活的保護(hù)作用，為神經(jīng)損傷提供新的治療措施。 方法： 1)以人胚腎293細(xì)胞為包裝細(xì)胞，擴(kuò)增Adv-CT1；應(yīng)用免疫組化技術(shù)鑒定Adv-CT1，用TCID50(tissue culture infectious dose 50，50％組織培養(yǎng)感染劑量)方法檢測其滴度。 2)在原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中分別加入不同濃度的谷

2、氨酸(50、100、200、400 μmol/L)，用臺盼藍(lán)染色法檢測存活率，TUNEL細(xì)胞凋亡技術(shù)檢測凋亡率，評定谷氨酸對海馬神經(jīng)元的損傷作用。 3)Adv-CT1轉(zhuǎn)染神經(jīng)元后，谷氨酸誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡，觀察CT-1對損傷神經(jīng)元的保護(hù)作用，并觀察Caspase-3(cysteinyl aspartate specific protease-3，半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶-3)基因在損傷神經(jīng)元表達(dá)。 結(jié)果： 1)擴(kuò)

3、增出病毒滴度為10<'8>-10<'9>pfu/ml的重組腺病毒-心肌營養(yǎng)素-1。 2)不同濃度的谷氨酸(50、100、200、400 μmol/L)作用于海馬神經(jīng)元后，可引起以下改變：a.臺盼藍(lán)染色顯示谷氨酸能顯著降低海馬神經(jīng)元的存活率，不同濃度的谷氨酸組與對照組比較差異均有顯著性(P<0.01)，而且隨著谷氨酸濃度的升高，神經(jīng)元的存活率也逐漸降低；b.TUN-E1灤色顯示谷氨酸能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，與對照組比較差異有顯著性(P<0

4、.01)，在濃度為50、100 μmol/L時，細(xì)胞凋亡率隨著濃度的升高而升高，在濃度超過100 μmol/L時，細(xì)胞凋亡率隨著濃度的升高而降低。 3)Adv-CT1轉(zhuǎn)染神經(jīng)元后，50 μmol/L谷氨酸作用于神經(jīng)元，結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染AdV-CT1的細(xì)胞存活率明顯高于未轉(zhuǎn)染組，細(xì)胞凋亡率明顯低于未轉(zhuǎn)染組，Caspase-3陽性率明顯低于未轉(zhuǎn)染組(P<0.05)。 結(jié)論：Adv-CT1對損傷神經(jīng)元有保護(hù)作用，其機(jī)制可能是通過