谷氨酸鈉對體外培養(yǎng)耳蝸螺旋神經(jīng)元影響的初步觀察.pdf

1、目的 有研究證實，噪聲、缺血、缺氧、感染、耳毒性藥物所引起的感音神經(jīng)性聾，多伴有直接或間接的神經(jīng)細(xì)胞損傷的病理改變。而這些病理改變與傳入神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸(glutamic acid)在耳蝸中的堆積有關(guān)。本文旨在觀察低濃度谷氨酸鈉(glutamate)對體外培養(yǎng)的耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(spiral ganglion cells，SGCs)的損傷作用，并初步探討損傷機制，為感音神經(jīng)性聾的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。 方法 以

2、出生1天的BAIB/C小鼠為研究對象，進(jìn)行離體SGCs培養(yǎng)，在培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，應(yīng)用不同濃度(0、100、200、500、100μmol/L)的谷氨酸鈉干預(yù)后，采用DNA ladder及Hoechst33258染色法觀察SGCs的凋亡情況，應(yīng)用半定量RT-PCR方法觀察Bcl-2基因的表達(dá)情況。應(yīng)用Image Master VDS3.0軟件分析系統(tǒng)進(jìn)行光密度測定，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(means±SD)表示，差異顯著性采用t檢驗，以P<0.

3、05作為有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果 SGCs培養(yǎng)24小時后，大部分呈典型的雙極神經(jīng)元。螺旋神經(jīng)節(jié)活細(xì)胞胞體橢圓形或圓形，突起細(xì)長，起始部較窄，交織成網(wǎng)狀。熒光染色觀察，不同濃度Glu處理后的細(xì)胞凋亡率分別為13 ± 2.2353(0μmol/L) ，48.3333 ± 4.2147(100μmol/L) ，100.3333±9．1352(200μmol/L)，179．3333 ± 16．2235(500μmol/L)

4、，236.6667±24(1000μmol/L)，其中谷氨酸鈉濃度在100μmol/L以上的凋亡率與對照組比具有顯著差異(P<0.05)，且隨著谷氨酸鈉濃度的增加，凋亡率增加。此外，隨著谷氨酸鈉濃度的增加，Bcl-2基因的表達(dá)有上升趨勢，谷氨酸鈉濃度在10μmol/L以上者．Bcl-2基因的表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.05)。 結(jié)論 低濃度谷氨酸鈉能誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的SGCs發(fā)生凋亡，這種損傷作用隨著谷氨酸鈉濃度的增加而逐漸增強；