CCI大鼠前扣帶皮層NR2B受體對突觸蛋白PSD-95與Homer1b-c表達的調(diào)控作用.pdf

1、目的：
　　通過觀察抑制前扣帶皮層NR2B受體對CCI大鼠突觸蛋白PSD-95與Homer1b/c表達影響，探討NR2B受體在神經(jīng)病理性疼痛的作用及其可能機制。
　　方法：
　　第一部分:觀察CCI模型大鼠機械縮足反射閾值(MWT)和熱縮足反射潛伏期(TWL)的變化。8只大鼠隨機分為2組(n=4):Sham組（假手術(shù)組）、CCI組(CCI模型組)，CCI組行左側(cè)坐骨神經(jīng)結(jié)扎，Sham組僅暴露左側(cè)坐骨神經(jīng)但不結(jié)扎。分別測

2、定CCI建立前、建立后1d、2d、3d、5d、7d后MWT和TWL值。
　　第二部分:觀察CCI大鼠前扣帶皮層(ACC) NR2B受體、突觸蛋白PSD-95和Homer1b/c表達量的變化。8只大鼠隨機分為2組(n=4):Sham組、CCI組，在CCI模型建立后7d，采用Western blotting法分別檢測大鼠CCI結(jié)扎側(cè)（同側(cè)）與對側(cè)ACC區(qū)域NR2B受體、突觸蛋白PSD-95和Homer1b/c表達量的變化。
　　

3、第三部分:觀察CCI大鼠ACC小膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞活化情況及NR2B受體的定位情況。8只大鼠隨機分為2組(n=4):Sham組、CCI組，在CCI模型建立后7d，采用免疫熒光方法分別檢測大鼠同側(cè)與對側(cè)ACC小膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞的活化情況及NR2B受體在小膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞、神經(jīng)元的表達與定位。
　　第四部分:觀察CCI大鼠ACC微量注射NR2B受體抑制劑Ro25-6981對神經(jīng)病理性疼痛的影響。16只大鼠隨機分為4組(

4、n=4):Sham組、CCI組、DMSO組、Ro組。DMSO組、Ro組大鼠CCI后第5d、6d、7d ACC分別注入DMSO（0.5μL/側(cè)）或Ro25-6981[0.5μL(2.5μg/μL)/側(cè)]。每組大鼠在術(shù)前1d、術(shù)后3d、術(shù)后第5d、6d、7d給藥2h后測定MWT和TWL值。
　　第五部分:觀察CCI大鼠ACC注射Ro25-6981后突觸蛋白PSD-95、Homer1-b/c表達量的影響。16只大鼠隨機分為4組(n=4)

5、:Sham組、CCI組、DMSO組、Ro組。DMSO組、Ro組大鼠CCI后第5d、6d、7d ACC分別注入DMSO(0.5μL/側(cè))或Ro25-6981[0.5μL(2.5μg/μL)/側(cè)],第7d注藥后2h取材ACC，Westem blotting法檢測ACC區(qū)域突觸蛋白PSD-95、Homer1b/c的表達量。采用免疫共沉淀法(Co-Ip)檢測Homer1b/c與NR2B及PSD-95的相互作用。
　　結(jié)果：
　　1.

6、與Sham組大鼠相比，CCI組1d、2d、3d、5d、7d MWT和TWL值均明顯降低，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　2.CCI模型建立后7d，大鼠ACC同側(cè)與對側(cè)NR2B受體，突觸蛋白PSD-95、Homer1 b/c表達量均明顯增加，與Sham組大鼠相比，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。
　　3.CCI模型建立后7d，大鼠ACC同側(cè)與對側(cè)小膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞活化數(shù)量明顯增加，與Sham組大鼠相比，有統(tǒng)計學(xué)意義(P

7、＜0.01)。免疫熒光共染發(fā)現(xiàn)NR2B受體僅定位于神經(jīng)元上。
　　4.大鼠CCI后第5d、6d、7d連續(xù)雙側(cè)ACC微量注射NR2B受體抑制劑Ro25-6981后可明顯提高大鼠MWT和TWL。與CCI組和DMSO組相比，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　5.大鼠雙側(cè)ACC微量注射Ro25-6981可顯著下調(diào)ACC突觸蛋白PSD-95表達量，與CCI組和DMSO組相比，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。而對Homer1 b/c表達