高同型半胱氨酸血癥聯(lián)合球囊損傷致兔動脈粥樣硬化動物模型建立的實驗研究.pdf

1、目的：采用高蛋氨酸飼料致兔高同型半胱氨酸血癥及結合球囊損傷腹主動脈致動脈粥樣硬化模型的相關研究，為進一步進行藥物干預實驗提供實驗模型。
　　方法：
　　1．實驗動物：健康雄性新西蘭大耳白兔32只，體重2.0-2.5 kg，購自蘭州大學實驗動物中心。
　　2．建立模型：使用2％的L-蛋氨酸飼料喂養(yǎng)新西蘭大耳白兔，2周后再以球囊損傷造成腹主動脈內膜損傷，喂養(yǎng)12周來建立高同型半胱氨酸血癥及動脈粥樣硬化模型。
　　3．

2、動物分組：將32只新西蘭大耳兔隨機分成4組，正常對照組；球囊損傷組；蛋氨酸喂養(yǎng)組；模型組（2％L-蛋氨酸飼料+腹主動脈球囊損傷）。
　　4．觀察指標：①四個組分別于0周、2周及12周時抽血測定血同型半胱氨酸濃度；②四個組分別于12周末時抽血測定血脂（即TG、Tc、LDL-c、HDL-c、Ox-LDL）濃度；③四個組分別于12周末時抽血測定 MMP-9及NF-κB的濃度；④觀察四個組12周末時腹主動脈大體標本油紅Ｏ染色結果；⑤觀察四

3、個組12周末時腹主動脈蘇木精-伊紅染色結果。
　　結果：給予2％L-蛋氨酸顆粒飼養(yǎng)2周后，兔血清同型半胱氨酸水平明顯增高(P<0.05)，此時予腹主動脈內膜球囊損傷，12周后在兔損傷血管段形成了特有的動脈粥樣硬化病變，并且同時相對于單純給予腹主動脈內膜球囊損傷及2％L-蛋氨酸顆粒飼料的兔粥樣斑塊面積更大、內膜損傷更嚴重。
　　1．四個組分別于0周、2周及12周時的血同型半胱氨酸濃度：實驗0周時，32個樣本中血清 Hcy符合正

4、態(tài)分布，正常值范圍為4.03-15.11μmol/L，各組之間 Hcy差異無顯著性意義(P>0.05)；2周時，蛋氨酸組和模型組的Hcy水平較正常組和損傷組顯著升高(P<0.05)；12周時，各組 Hcy水平與2周時相當(P>0.05)。
　　2．四個組分別于12周時血清動脈粥樣硬化相關因子的測量：與對照組比較，蛋氨酸組和模型組兔血清 Ox-LDL值顯著升高(P<0.05)，蛋氨酸組和模型組兔血清 Ox-LDL值具有顯著性差異(P

5、<0.05)，而損傷組兔子血清 Ox-LDL未顯著升高（P>0.05）。與對照組比較，各組兔子血清 MMP-9，VCAM-1均無顯著性升高（P>0.05）。
　　3．半定量檢測各組兔腹主動脈組織中MMP-9，NF-κB水平：與對照組比較，球囊損傷組、蛋氨酸組、模型組兔腹主動脈組織中MMP-9顯著升高(P<0.05)，三組之間比較具有顯著性差異(P<0.05)。球囊損傷組、蛋氨酸組、模型組兔子腹主動脈組織中NF-κB顯著升高(P<0

6、.05)，三組之間比較具有顯著性差異(P<0.05)。
　　4．各組兔腹主動脈粥樣斑塊形成情況（油紅 O染色）：正常組兔腹主動脈內膜表面光滑，油紅O不著色。球囊損傷組兔可見內皮剝脫和內膜增生相間，以血管分支開口處尤為明顯，表面無油紅O著色。蛋氨酸組兔腹主動脈表面有小面積紅染的脂肪斑塊形成，粥樣斑塊面積占4.6％左右。模型組兔腹主動脈內膜表面不平，可見鮮紅色脂質條紋和斑塊，面積9.6％左右。蛋氨酸組與模型組粥樣斑塊面積差異具有顯著性

7、(P<0.05)。
　　5．各組兔腹主動脈病理改變（H.E染色×100）：對照組兔腹主動脈內皮平整，血管平滑肌細胞排列整齊。球囊損傷組兔腹主動脈內膜增厚，中層 VSMC排列紊亂，內膜/內中膜厚度百分比29.7％左右。蛋氨酸組兔子內膜增厚，內膜/內中膜厚度百分比32.5％左右。模型組內膜增厚，內膜/內中膜厚度百分比43.1％左右。蛋氨酸組與模型組的內膜/內中膜厚度百分比差異具有顯著性（P<0.05）。
　　結論：
　　1

8、．采用高蛋氨酸顆粒飼料喂養(yǎng)新西蘭大耳白兔2周可形成高同型半胱氨酸血癥，其濃度和12周時相當。
　　2．球囊損傷腹主動脈可啟動并形成動脈粥樣硬化，但僅能形成纖維斑塊，即通常所說的硬斑塊，而聯(lián)合高同型半胱氨酸血癥可導致脂肪斑塊，即通常所說的軟斑塊。
　　3．高同型半胱氨酸血癥為致兔動脈粥樣硬化的獨立危險因素之一。
　　4．高同型半胱氨酸血癥和球囊損傷腹主動脈兩種因素共同作用可造成動脈粥樣硬化軟斑塊，建模周期較短，如果實驗時

9、間延長至3－6月，可形成更為典型的大面積軟斑塊模型。
　　5．本實驗制作的動物模型可以作為傳統(tǒng)藥物和轉基因藥物干預高同型半胱氨酸血癥所致軟斑塊的模型。
　　6．兔高同型半胱氨酸血及腹主動脈內膜球囊損傷引起的氧化應激反應是引起動脈粥樣硬化的重要機制。
　　7．兔高同型半胱氨酸血及腹主動脈內膜球囊損傷引起的血管重塑是引起動脈粥樣硬化的重要機制。
　　8．兔高同型半胱氨酸血及腹主動脈內膜球囊損傷引起的內皮損傷是引起動脈