子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中microRNA差異表達譜分析及其靶基因預(yù)測的研究.pdf

1、研究背景與目的:子宮內(nèi)膜癌是累及女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一,在很多歐美國家,其發(fā)病率居女性生殖系統(tǒng)癌癥的首位。而在我國,子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率也僅次于子宮頸癌,居女性生殖系統(tǒng)癌癥的第二位,且有逐年上升趨勢。子宮內(nèi)膜癌中有85％-90％為Ⅰ型子宮內(nèi)膜樣腺癌(雌激素依賴型),嚴重危害女性健康。目前認為子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生可能與長期持續(xù)的雌激素刺激或者肥胖、高血壓、糖尿病、不孕等因素相關(guān),但其機制尚不明確。因此對子宮內(nèi)膜癌尤其是內(nèi)膜樣腺癌發(fā)病機

2、制和新診斷方法的探討與研究十分必要。
　　 microRNA(MicroRNA)是一種由22-25個核苷酸組成的非編碼單鏈小RNA,目前認為在哺乳動物體內(nèi),microRNA與靶基因作用,使靶基因的mRNA在轉(zhuǎn)錄后的翻譯過程中被抑制或直接降解,導(dǎo)致靶基因的蛋白表達水平降低,從而間接參與到包括生長發(fā)育、造血、器官形成、細胞增殖、凋亡乃至腫瘤發(fā)生的過程中。近些年來,很多研究圍繞著microRNA與各種腫瘤間的關(guān)系展開,而針對子宮內(nèi)膜樣

3、腺癌中microRNA變化的研究目前尚不多。
　　 本研究通過篩查子宮內(nèi)膜樣腺癌組織與正常對照組子宮內(nèi)膜組織中microRNA的表達差異,同時結(jié)合已有資料對表達差異明顯的microRNA進行靶基因預(yù)測,并使用微陣預(yù)測分析(PAM)工具初步預(yù)測一組可以用于區(qū)分不同病理分化子宮內(nèi)膜樣腺癌的microRNA。進而從分子學(xué)水平探討子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)病機制。
　　 方法:
　　 1.使用丹麥ExiqonTM公司microR

4、NA芯片檢測出子宮內(nèi)膜樣腺癌組織和正常內(nèi)膜組織microRNA表達譜,篩選出表達差異明顯的microRNA。
　　 2.挑選出上調(diào)及下調(diào)明顯的microRNA各1例使用實時定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(realtime RT-PCR)進行驗證。
　　 3.結(jié)合以往研究中與子宮內(nèi)膜樣腺癌及子宮內(nèi)膜癌關(guān)系密切的基因結(jié)果,使用三種不同的預(yù)測軟件對本實驗中出現(xiàn)明顯差異表達的microRNA進行靶基因預(yù)測,并統(tǒng)合結(jié)果。
　　 4.使用

5、微陣預(yù)測分析工具處理高、中、低分化子宮內(nèi)膜樣腺癌及正常內(nèi)膜中表達的microRNA數(shù)據(jù),初步得出一組能夠區(qū)分以上四組樣本的microRNA標(biāo)記。
　　 結(jié)果:
　　 1.在芯片覆蓋的847條人microRNA中,子宮內(nèi)膜樣腺癌組織相較于正常內(nèi)膜組織出現(xiàn)18個明顯上調(diào),31個明顯下調(diào)的microRNA。
　　 2.包括PTEN、FOX家族等基因在內(nèi)的51種基因被認為是上述差異表達的microRNA的預(yù)測靶基因。

6、r>　　 3.Mir-200c等9種microRNA是一組可用于鑒別不同分化子宮內(nèi)膜樣腺癌的生物標(biāo)記microRNA。
　　 結(jié)論:
　　 1.相較于正常內(nèi)膜組織,多種microRNA在子宮內(nèi)膜樣腺癌中出現(xiàn)明顯表達差異。
　　 2.mir-205等microRNA在子宮內(nèi)膜樣腺癌中表現(xiàn)出明顯的變化趨勢,可能是影響子宮內(nèi)膜樣腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵microRNA。
　　 3.mir-205、mir-200家族