MicroRNA-30c及其靶基因MTA-1在子宮內(nèi)膜癌中的作用研究.pdf

1、目的
　　子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率近年呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，嚴(yán)重影響女性生命健康。目前有研究顯示microRNA(miRNA)表達(dá)的失調(diào)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。我們的前期研究已經(jīng)證實(shí)microRNA-30c(miR-30c)在子宮內(nèi)膜癌中以腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因-1(MTA-1)為靶基因，參與子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株增殖及侵襲能力的調(diào)節(jié)。本研究旨在深入探究子宮內(nèi)膜癌中miR-30c的抑癌作用及其與靶基因MTA-1間的關(guān)系，并進(jìn)一步探討雌激素對(duì)兩者表達(dá)的

2、調(diào)控作用，為miR-30c成為提示子宮內(nèi)膜癌預(yù)后相關(guān)分子標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)奠定基礎(chǔ)。
　　方法
　　收集南京鼓樓醫(yī)院子宮內(nèi)膜癌手術(shù)病人的腫瘤組織（21例）及因非惡性因素行子宮切除術(shù)患者的正常內(nèi)膜組織（14例），Realtime-PCR技術(shù)測(cè)定miR-30c在不同內(nèi)膜組織中以及不同子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況。體外培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞株利用LipfectamineTM2000分別介導(dǎo)miR-30c的mimics(m

3、iR-mi)、inhibitor(miR-in)及MTA-1siRNA(si-MTA-1)轉(zhuǎn)染入Ishikawa細(xì)胞，并分別以各自的以無(wú)義隨機(jī)序列scramble作為陰性對(duì)照，Realtime-PCR技術(shù)檢測(cè)miR-30c及MTA-1表達(dá)水平的變化;Westernblot技術(shù)檢測(cè)MTA-1蛋白質(zhì)表達(dá)的變化;并應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，人工重組基底膜侵襲小室(Transwell)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力。雌激素作用于Ishikawa及HE

4、C-1-B細(xì)胞后Realtime-PCR技術(shù)檢測(cè)miR-30c及MTA-1表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果
　　1、miR-30c在腫瘤組織中低表達(dá)于正常內(nèi)膜組織，在ER陽(yáng)性的Ishikawa細(xì)胞中低表達(dá)于ER陰性的HEC-1-B細(xì)胞，而MTA-1在不同細(xì)胞株中的表達(dá)與miR-30c負(fù)相關(guān)。
　　2、上調(diào)及下調(diào)miR-30c表達(dá)，分別降低及增加了MTA-1蛋白的表達(dá)，并且MTA-1表達(dá)的降低可以負(fù)反饋調(diào)節(jié)miR-30c，使得

5、其表達(dá)上調(diào)。
　　3、上調(diào)miR-30c可以抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株的增殖、遷移及侵襲能力，并通過(guò)共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-30c通過(guò)直接作用于MTA-1起調(diào)控作用。
　　4、雌激素通過(guò)不同的方式作用于Ishikawa及HEC-1-B細(xì)胞株分別下調(diào)miR-30c表達(dá)及上調(diào)MTA-1的表達(dá)。
　　結(jié)論
　　本研究證實(shí)miR-30c在子宮內(nèi)膜癌組織中低表達(dá)，并且通過(guò)直接調(diào)控MTA-1表達(dá)而起到抑癌作用。另外，雌激素是miR-