microRNA-141在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其靶基因預(yù)測.pdf

1、目的：近年來，結(jié)直腸癌已成為罹患率較高的消化道常見惡性腫瘤之一。我國大腸癌發(fā)病率在過去的30年呈顯著增長，已升至惡性腫瘤死因的第4位，嚴(yán)重威脅人民的生命及生活質(zhì)量。我國結(jié)直腸癌的早期篩查工作在我國大城市逐漸開展，但是在我國廣大地區(qū)篩查工作并不普及，許多患者在首診時(shí)已是局部進(jìn)展期或出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，手術(shù)切除困難或失去手術(shù)機(jī)會(huì)，對(duì)于進(jìn)展期結(jié)直腸癌，術(shù)后復(fù)發(fā)率高患者預(yù)后較差。通過從基因、分子水平研究結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制，尋找結(jié)直腸癌特異性的分子標(biāo)志

2、物以期早期診斷結(jié)直腸癌，并在基因、分子水平探討新的治療方式。微小 RNA(MicroRNA, miRNA)一般是由18-25個(gè)核苷酸組成的的非編碼小分子RNA。作為單鏈的 RNA分子，其主要作用于靶基因3’非翻譯區(qū)(untranslated region,UTR)，引起靶 mRNA的降解或抑制其翻譯，其功能為調(diào)節(jié)內(nèi)源基因的表達(dá)，調(diào)控細(xì)胞活動(dòng)的大多數(shù)環(huán)節(jié)都有其參與。近年來多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)miRNA在多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸等過程中發(fā)揮重要作

3、用。其中，miRNA-200家族在多種惡性腫瘤中的研究取得了較大的進(jìn)展。microRNA-141為 miRNA-200家族重要一員，常作為潛在的抑癌基因或癌基因發(fā)揮作用，可能與腫瘤細(xì)胞分化、增殖、侵襲、遷移和轉(zhuǎn)移相關(guān)。本研究擬通過實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測26例結(jié)直腸癌組織與癌旁腸粘膜組織中microRNA-141的表達(dá)水平，探究表達(dá)水平與結(jié)直腸癌患者的臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性。利用生物信息學(xué)方法，篩選出miRNA-141的相關(guān)靶基因，對(duì)篩

4、選出的靶基因的功能進(jìn)行GO分析，進(jìn)一步探究結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展機(jī)制。
　　方法：
　　1、選取2014年11月至2015年3月期間在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外二科手術(shù)切除的26例結(jié)直腸癌組織及其癌旁正常腸粘膜組織。
　　2、通過利用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR檢測技術(shù)檢測癌組織及癌旁正常腸粘膜組織中microRNA-141的表達(dá)水平；搜集26例患者術(shù)后的病理情況及臨床相關(guān)數(shù)據(jù)，包括患者年齡、性別、腫瘤對(duì)腸管的外侵情況（T分期）、淋巴

5、結(jié)轉(zhuǎn)移情況（N分期）、TNM分期、病理分化程度、術(shù)前癌胚抗原（CEA）水平。
　　3、統(tǒng)計(jì)分析：計(jì)量資料以(?x±s)表示，通過配對(duì)t檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法檢驗(yàn)腺癌組織及配對(duì)癌旁正常腸粘膜間的microRNA-141表達(dá)量差異，通過利用單因素方差分析方法檢測microRNA-141表達(dá)量的差異與患者術(shù)后病理結(jié)果及臨床數(shù)據(jù)間的相關(guān)性，設(shè)定P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,利用SPSS l3.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
　　4、通過生物信息學(xué)方法

6、，在miRecords平臺(tái)，其中包含11個(gè)醫(yī)學(xué)信息學(xué)軟件篩選miRNA-141的靶基因，選取6個(gè)及以上軟件共同預(yù)測的靶基因，對(duì)靶基因進(jìn)行GO分析，篩選出具有顯著性、低誤判率的相關(guān)功能。
　　結(jié)果：
　　1、首先，我們運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù)檢測了結(jié)直腸癌組織和癌旁正常腸粘膜中miR-141的表達(dá)水平，與癌旁正常腸粘膜組織相比，結(jié)直腸癌組織中的microRNA-141的表達(dá)水平明顯下降。microRNA-141在結(jié)直腸癌組

7、織的△Ct值為11.686?4.296，而在配對(duì)正常腸粘膜組織△Ct值為13.321?3.827。且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。
　　2、microRNA-141表達(dá)量與術(shù)后患者標(biāo)本病理情況及臨床參數(shù)年齡、性別、腫瘤在腸管內(nèi)浸潤深度（T分期）、腫瘤伴淋巴轉(zhuǎn)移情況（N分期）， TNM分期、癌胚抗原（CEA）水平均無顯著的關(guān)系。中分化腺癌為18例，低分化腺癌8例，microRNA-141的表達(dá)分別為8.015（2.078-13.

8、952）、1.363（0.461-2.265）,P<0.05。陽性結(jié)果提示：microRNA-141的表達(dá)情況有望成為結(jié)直腸癌的預(yù)后判斷指標(biāo)之一。
　　3、通過生物學(xué)信息法篩選出的靶基因共77個(gè)，基于Gene Ontology數(shù)據(jù)庫，對(duì)靶基因進(jìn)行GO分類，并對(duì)其進(jìn)行顯著性篩選，提示部分靶基因參與細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)、囊泡的?？俊⒛ぶg的對(duì)接、外胚層的發(fā)育等生物學(xué)過程。
　　結(jié)論：
　　1、microRNA-141在結(jié)直腸癌

9、組織中低表達(dá)，提示microRNA-141可能在結(jié)直腸癌中發(fā)揮類似抑癌基因的作用。
　　2、microRNA-141表達(dá)水平與腫瘤病理分化程度存在相關(guān)性，這一點(diǎn)提示我們microRNA-141有望成為結(jié)直腸癌的預(yù)后判斷指標(biāo)之一，為我們判斷結(jié)直腸癌的預(yù)后提供了參考。
　　3、經(jīng)過生物信息學(xué)預(yù)測，miRNA-141能夠靶定相關(guān)基因，并通過影響其功能，參與細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)、囊泡的停靠、膜之間的對(duì)接、外胚層的發(fā)育等生物學(xué)過程，進(jìn)而引