microRNA-301b、microRNA-376a在結(jié)直腸癌中的表達及其臨床意義.pdf

1、目的：本研究以結(jié)直腸癌患者的腫瘤組織和與其對應的上切緣無瘤粘膜組織為標本，檢測microRNA-301b（miR-301b）和microRNA-376a（miR-376a）在腫瘤組織和與其對應的上切緣無瘤粘膜組織中的表達，并分析其與結(jié)直腸癌臨床病理特征之間的關(guān)系。
　　方法：
　　1收集2015年1月到2016年1月在唐山工人醫(yī)院普外科行結(jié)直腸癌手術(shù)患者的新鮮癌組織標本28例，同時選取對應的上切緣無瘤粘膜組織28例，離體后迅

2、速置于液氮，存于-80℃冰箱備用；
　　2提取組織總RNA，驗證RNA的完整性之后將其反轉(zhuǎn)錄成c-DNA,應用實時定量PCR的方法，檢測miR-301b和miR-376a腫瘤組織和與其對應的上切緣無瘤粘膜組織中的表達情況；
　　3分析miR-301b和miR-376a的相對表達水平與患者的性別、年齡、部位、浸潤深度、分化程度、組織學類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、腫瘤標志物（CEA、CA199、CA724）之間的關(guān)系；
　

3、　4使用GraphPad Prism5軟件進行統(tǒng)計學分析，由于部分數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布，所以所有數(shù)據(jù)均以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）表示，配對數(shù)據(jù)采用Wilcoxon檢驗方法，非配對數(shù)據(jù)采用Manny-Whitney檢驗方法，結(jié)果以P<0.05具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：
　　1 miR-301b在結(jié)直腸癌組織中表達分析
　　以無瘤組織樣本檢測的CT值為對照，利用2-ΔΔCt的方法計算miR-301b在結(jié)直腸癌組織和上切緣無瘤粘

4、膜組織中的相對表達水平，結(jié)果顯示，miR-301b在結(jié)直腸癌組織和上切緣無瘤粘膜組織中的相對表達水平的中位數(shù)分別為6.564和0.9353（P=0.0061），四分位數(shù)間距分別為（1.261，29.86）和（0.6053，3.180）；與上切緣無瘤粘膜組織比較，結(jié)直腸癌組織中miR-301b表達顯著上調(diào)，結(jié)果具有統(tǒng)計學差異。
　　2 miR-301b與結(jié)直腸癌組織臨床病理特征之間的關(guān)系分析
　　利用2-ΔΔCt的方法計算出m

5、iR-301b在結(jié)直腸癌組織和上切緣無瘤粘膜組織中的相對表達水平后，將每個獨立樣本結(jié)直腸癌組織的Fc值除以對應的上切緣無瘤粘膜組織的Fc值，得出的結(jié)果即為每個樣本的miR-301b相對表達量。結(jié)果顯示，miR-301b在中高分化和低分化結(jié)直腸癌組織中的相對表達量中位數(shù)分別為1.383和57.31（P=0.0115），四分位數(shù)間距分別為（1.022，11.45）和（43.44，126.9），在無遠處轉(zhuǎn)移和發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的患者中的相對表達量分

6、別為1.248和12.43（P=0.0159），四分位數(shù)間距分別為（0.6004，17.34）和（4.771，120.3），在CA724小于5和大于等于5的患者中相對表達量分別為1.392和126.9（P=0.0142），四分位數(shù)間距分別為（1.056，14.89）和（42.46，146.3），結(jié)果具有統(tǒng)計學差異。
　　3 miR-376a在結(jié)直腸癌組織中表達分析
　　以無瘤組織樣本檢測的CT值為對照，利用2-ΔΔCt的方法

7、計算miR-376a在結(jié)直腸癌組織和上切緣無瘤粘膜組織中的相對表達水平，結(jié)果顯示，miR-376a在結(jié)直腸癌組織和上切緣無瘤粘膜組織中的相對表達水平中位數(shù)分別為1.685和1.164（P=0.0153），四分位數(shù)間距分別為（1.079，2.332）和（0.326，1.966）；與上切緣無瘤粘膜組織比較，結(jié)直腸癌組織中miR-376a表達顯著下調(diào)，結(jié)果具有統(tǒng)計學差異。
　　4 miR-376a與結(jié)直腸癌組織臨床病理特征之間的的關(guān)系分

8、析
　　利用2-ΔΔCt的方法計算出miR-376a在結(jié)直腸癌組織和上切緣無瘤粘膜組織中的相對表達水平后，將每個獨立樣本結(jié)直腸癌組織的Fc值除以對應的上切緣無瘤粘膜組織的Fc值，得出的結(jié)果即為每個樣本的miR-376a相對表達量。結(jié)果顯示，miR-376a在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的相對表達量的中位數(shù)分別為1.248和0.586（P=0.0232），四分位數(shù)間距分別為（0.717，2.025）和（0.184，0.915），

9、在無遠處轉(zhuǎn)移和有遠處轉(zhuǎn)移的患者中相對表達量的中位數(shù)分別為1.070和0.522（P=0.0486），四分位數(shù)間距分別為（0.527，1.727）和0.522（0.192，0.689），在CEA小于20和大于等于20的患者中相對表達量分別為1.032和0.464（P=0.0404），四分位數(shù)間距分別為（0.773，1.715）和（0.188，0.571），結(jié)果具有統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)論：
　　1 miR-301b可能作為促癌因