結直腸癌中RIP3基因的表達及其功能研究.pdf

1、目的:
　　本研究旨在探討RIP3基因在結直腸癌組織中的表達及其與臨床病理指標之間的關系，并進一步探查其在結直腸癌細胞中發(fā)揮的功能，有助于揭示結直腸癌發(fā)生發(fā)展的分子生物學機制。
　　方法:
　　1.采用實時定量熒光PCR（Real-time PCR）、蛋白印記法（Western blot）檢測RIP3在結直腸癌組織及其配對正常膜黏組織中mRNA及蛋白表達差異。
　　2.采用免疫組織化學（Immunohistoch

2、emistry）檢測結直腸癌及其配對正常黏膜組織RIP3基因的蛋白表達水平，并通過Kaplan-Meier及Cox比例風險模型分析RIP3在結直腸癌中的表達差異與患者術后生存率、復發(fā)率之間的關系。
　　3.通過構建RIP3基因過表達質粒，體外轉染結直腸癌細胞。研究RIP3過表達對結直腸癌RKO細胞的細胞增殖、平板克隆集落形成、侵襲與轉移、誘導凋亡等生物學功能的影響。探討過表達RIP3基因對結直腸癌細胞生物學功能的影響。
　　

3、結果:
　　1.Real-time PCR結果顯示腫瘤組織中RIP3 mRNA表達水平低于正常組織2倍以上的達60.5％（23/38）。Western blot結果提示RIP3蛋白在結直腸癌組織中的表達低于配對正常組織中的表達。
　　2.免疫組織化學結果顯示RIP3表達率與患者腫瘤大小(P=0.027),腫瘤遠處轉移(P=0.016)與AJCC分期(P=0.002)高度相關。Kaplan-Meier和Cox比例風險模型顯示R

4、IP3陰性表達病例的總生存率及無病生存率均明顯低于RIP3陽性表達病例(P=0.004, P=0.015)。
　　3.體外細胞功能試驗發(fā)現，結直腸癌RKO細胞過表達RIP3能顯著抑制細胞的增殖、集落形成、侵襲與轉移能力，通過流式細胞技術進一步分析發(fā)現RIP3過表達細胞凋亡比例明顯升高。
　　結論:
　　1.結直腸癌中RIP3 mRNA及蛋白表達水平較正常配對黏膜上皮組織表達顯著降低。
　　2.RIP3表達降低與一