結(jié)直腸癌中ATP5J基因的差異表達(dá)及其功能的研究.pdf

1、ATP5J，又稱偶聯(lián)因子6(coupling factor6，CF6)，是F1F0-ATP合酶(F1F0-ATPase)的組成亞單位之一。F1F0-ATP合酶，屬F型ATP酶，在細(xì)胞內(nèi)催化能源物質(zhì)ATP的合成，主要由兩部分組成:水溶性的F1復(fù)合體和脂溶性的跨膜部分F0。 ATP5J是F0的成分之一，起著連接F1和F0的作用。最近我們在篩查結(jié)直腸癌相關(guān)基因時發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌臨床標(biāo)本中ATP5J的mRNA表達(dá)水平明顯增高。盡管目前已發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞

2、中存在ATP合酶某些亞單位的表達(dá)異常，但是關(guān)于ATP5J基因在結(jié)直腸癌中的表達(dá)情況及其功能和意義還沒有可檢索的報道。
　　目的:驗(yàn)證ATP5J基因在結(jié)直腸癌組織中差異表達(dá)的情況，并分析其臨床意義;研究ATP5J表達(dá)高低對結(jié)腸癌細(xì)胞的生物學(xué)行為和抗腫瘤治療敏感性的影響，從而分析其功能。
　　方法:運(yùn)用RT-PCR、免疫印跡及免疫組化法檢測結(jié)直腸癌細(xì)胞系、結(jié)直腸癌臨床標(biāo)本腫瘤組織及正常組織中ATP5J基因在mRNA水平和蛋白質(zhì)水

3、平的表達(dá)情況，分析其中的差異;收集相應(yīng)結(jié)直腸癌病人的臨床病理資料，并進(jìn)行隨訪，分析ATP5J表達(dá)高低和腫瘤臨床病理特征及患者預(yù)后之間的關(guān)系，評價ATP5J在結(jié)直腸癌中差異表達(dá)的臨床意義。設(shè)計(jì)針對ATP5J mRNA的小分子RNA，構(gòu)建ATP5J表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/ATP5J，通過小RNA干擾來下調(diào)或質(zhì)粒轉(zhuǎn)染來上調(diào)結(jié)腸癌細(xì)胞DLD1中ATP5J的表達(dá)水平，進(jìn)而運(yùn)用MTT、細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移試驗(yàn)以及細(xì)胞周期分析

4、等方法來評估ATP5J基因表達(dá)的改變對腫瘤細(xì)胞形態(tài)、生長、存活、遷移以及藥敏等方面的影響，評價ATP5J基因在結(jié)腸癌細(xì)胞中的功能。
　　結(jié)果:結(jié)直腸癌臨床標(biāo)本腫瘤組織中ATP5J的表達(dá)在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平均明顯高于正常組織，而且在對應(yīng)的轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中它的表達(dá)水平也明顯高于原發(fā)灶中的水平(P＜0.05)。臨床病理資料和隨訪結(jié)果分析顯示，ATP5J的表達(dá)水平僅僅和腫瘤的分化程度相關(guān)（P=0.045），和患者的性別、年齡、腫瘤T分期

5、、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，甚至生存率均無關(guān)（P＞0.05）。在結(jié)直腸癌細(xì)胞系(DLD1，RKO，SW620，SW480和Colo320)中，ATP5J的表達(dá)明顯高于正常人成纖維細(xì)胞(NHFB)(P＜0.05)。通過小RNA干擾來下調(diào)結(jié)腸癌細(xì)胞DLD1中ATP5J的表達(dá)，會影響該腫瘤細(xì)胞的遷移能力，并使得腫瘤細(xì)胞對5-氟尿嘧啶(5-Fu)的處理更加敏感;而通過穩(wěn)定轉(zhuǎn)染ATP5表達(dá)質(zhì)粒來上調(diào)該基因的表達(dá)則會得到相反的結(jié)果，即高表達(dá)ATP5J促進(jìn)腫瘤