結(jié)直腸癌中差異表達(dá)miRNA的篩選與功能研究.pdf

1、第一部分結(jié)直腸癌組織中差異表達(dá)miRNA的篩選及其調(diào)控靶基因的確定
　　目的:研究結(jié)直腸癌中全基因組水平上miRNA-mRNA相互調(diào)控關(guān)系，明確結(jié)直腸癌中差異表達(dá)的miRNA下游的靶基因及其調(diào)控的信號(hào)通路。方法:利用miRNA芯片及mRNA芯片確認(rèn)結(jié)直腸癌組織中miRNA及mRNA表達(dá)譜;應(yīng)用Pearson相關(guān)性分析，選取表達(dá)水平呈明顯負(fù)相關(guān)的miRNA-mRNA對(duì)，通過(guò)生物信息學(xué)篩選具有直接調(diào)控關(guān)系的miRNA-mRNA對(duì)，分析

2、其參與的信號(hào)通路。應(yīng)用realtimePCR及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證預(yù)測(cè)結(jié)果。結(jié)論:通過(guò)芯片分析，共篩選出32個(gè)差異表達(dá)的miRNA及2916個(gè)差異表達(dá)的mRNA，應(yīng)用芯片表達(dá)水平相關(guān)性分析及靶點(diǎn)預(yù)測(cè)軟件共篩選出72對(duì)表達(dá)水平呈明顯負(fù)相關(guān)的miRNA-mRNA對(duì)。其中包括22個(gè)差異表達(dá)的miRNA及58個(gè)差異表達(dá)mRNA，通過(guò)信號(hào)通路分析表明wnt通路可能受這些差異表達(dá)的miRNA調(diào)控。realtimePCR在40例樣本中對(duì)miRNA及mRNA表

3、達(dá)水平進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果與芯片結(jié)果一致。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)KLF4可能是mir-29a的靶基因。
　　結(jié)論:本研究共預(yù)測(cè)了在結(jié)直腸癌中miRNA-mRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，確認(rèn)了結(jié)直腸癌中差異表達(dá)的miRNA的靶基因，為進(jìn)一步機(jī)制研究提供線索。
　　第二部分:Mir-29a通過(guò)調(diào)控KLF4參與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的研究
　　目的:研究mir-29a在伴有肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中表達(dá)水平，探討其與臨床病理特征的聯(lián)系，明確mir-29a在結(jié)直腸癌組

4、織中表達(dá)水平與KLF4蛋白表達(dá)水平的相關(guān)性。方法:在68例結(jié)直腸癌患者中應(yīng)用realtimePCR檢測(cè)mir-29a表達(dá)水平，應(yīng)用組織芯片檢測(cè)結(jié)直腸癌組織中KLF4表達(dá)水平。結(jié)論:mir-29a在伴有結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者中表達(dá)水平明顯上調(diào)，KLF4表達(dá)水平在伴有肝轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中下調(diào)，mir-29a在結(jié)直腸癌中的表達(dá)水平與KLF4負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:mir-29a在伴有肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中表達(dá)上調(diào)，其表達(dá)水平與KLF4蛋白