頜骨骨髓基質(zhì)細胞與牙周膜干細胞的生物學(xué)特性比較.pdf

1、牙周病(periodontal disease)是一種累及牙骨質(zhì)、牙周膜和牙槽骨的慢性破壞性疾病，是造成成人牙齒脫落的主要病因。目前，組織工程是實現(xiàn)牙周再生最理想的方式。它包括三方面要素：種子細胞、支架材料和生長因子。合理選擇種子細胞是其成功的關(guān)鍵。牙周膜干細胞(PDLSCs)是目前公認的牙周組織再生最佳來源細胞,一定條件下可以構(gòu)建功能性牙周膜。但是，健康的牙周膜細胞需拔牙后分離培養(yǎng)獲取，限制了其臨床應(yīng)用。因此，尋找其它種子細胞源也一直

2、是國際相關(guān)熱點之一。大量的研究表明，來源于頜骨的骨髓基質(zhì)細胞具有旺盛的增殖能力和優(yōu)于髂骨來源的骨髓基質(zhì)細胞的成骨特性。我們通過頜骨骨髓基質(zhì)細胞(OF-MSCs)與牙周膜干細胞進行體內(nèi)外比較，初步研究頜骨骨髓基質(zhì)細胞的生物學(xué)特性，探討其用于牙周組織再生的可行性。本實驗中通過頜骨骨髓基質(zhì)細胞和牙周膜干細胞的原代培養(yǎng)，觀察細胞外形及克隆形成情況；CCK-8測細胞生長曲線；免疫熒光染色檢測STR0-1、CD146表達；定向誘導(dǎo)后檢測脂滴形成及堿

3、性磷酸酶活性變化情況，RT-PCR方法檢測7、14d成骨相關(guān)基因的表達情況；掃描電鏡觀察兩種細胞在HA/β-TCP材料表面的黏附、伸展情況，并植入裸鼠皮下(n=4)，8周后取材行組織學(xué)觀察來評價兩種細胞的成骨能力。
　　結(jié)果：
　　1、頜骨骨髓基質(zhì)細胞和牙周膜干細胞體外原代培養(yǎng)均能貼壁生長，呈成纖維樣細胞外形；頜骨骨髓基質(zhì)細胞具有較強克隆形成能力；生長曲線顯示兩種細胞生長趨勢相似，頜骨骨髓基質(zhì)細胞在6d左右基本進入平臺期，牙

4、周膜干細胞仍呈緩慢增長趨勢；兩種細胞均表達間充質(zhì)干細胞的表面標志STR0-1和血管旁標志CD146。
　　2、兩種細胞經(jīng)成脂誘導(dǎo)14d，油紅O染色可見脂滴形成；成骨誘導(dǎo)后RT-PCR均能檢測到兩種細胞均有成骨相關(guān)基因(OCN、OPN、ALP、runX2、BMP-2)的表達，其中OCN、OPN兩種基因在頜骨骨髓基質(zhì)細胞表達較早、較強。
　　3、在非誘導(dǎo)條件下，頜骨骨髓基質(zhì)細胞表現(xiàn)和牙周膜干細胞表現(xiàn)較低水平堿性磷酸酶活性，頜骨骨

5、髓基質(zhì)細胞稍強；在成骨誘導(dǎo)條件下，頜骨骨髓基質(zhì)基質(zhì)細胞堿性磷酸酶活性明顯較牙周膜干細胞強。
　　4、掃描電鏡觀察，兩種細胞均可在HA/β-TCP材料表面黏附、伸展良好。
　　5、植入裸鼠皮下8周，兩種細胞可在HA/β-TCP表面形成類骨質(zhì)樣結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)論：頜骨骨髓基質(zhì)細胞與牙周膜干細胞表現(xiàn)相似，均具有間充質(zhì)干細胞的一般特性，具有一定的體內(nèi)成骨潛能，但體外具有比牙周膜干細胞更強的成骨向分化能力。其在牙周組織缺損修復(fù)中發(fā)