青年乳腺癌VEGF、EGFR和Ki-67的表達(dá)及臨床病理分析.pdf

1、目的：探討青年乳腺癌患者的臨床病理特點(diǎn)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascaliaendothelial grouth factor,VEGF),表皮生長(zhǎng)因子受體(Epidermal growth factorreceptor,EGFR)和非組蛋白核蛋白(Ki-67)的表達(dá)情況以及與臨床特點(diǎn)和病理學(xué)特征的關(guān)系。達(dá)到對(duì)青年乳腺癌認(rèn)識(shí)的加深,爭(zhēng)取對(duì)青年乳腺癌做到早期診斷,規(guī)范治療方案,重視全身治療,改善其生存率。
　　 方法：通過(guò)電腦病案數(shù)

2、據(jù)庫(kù)檢索2005年1月至2008年12月間南方醫(yī)院住院并經(jīng)手術(shù)治療的符合入選標(biāo)準(zhǔn)的乳腺癌病例,共計(jì)477例。從中選擇青年乳腺癌患者標(biāo)準(zhǔn)(1)年齡小于35歲或者為35歲,性別均為女性；(2)我院初治的可手術(shù)病歷；(3)所以病例均病理論斷為痛；(4)術(shù)前未進(jìn)行放療,化療,內(nèi)分泌治療等；(5)臨床病例和病理資料完整；(6)患者民族均為漢族;(7)腋窩淋巴結(jié)清掃個(gè)數(shù)>10個(gè)淋巴結(jié)的病例。剔除臨床資料不完整、少數(shù)民族、術(shù)前曾接受放化療等輔助性治療

3、、乳腺癌復(fù)發(fā)病例。
　　 所選取的乳腺癌病例全部行HE染色、VEGF,EGFR及Ki-67免疫組化染色,從病理科獲得所選病例的病理切片以及石蠟塊,選擇合適的石蠟塊制作免疫組化病理白片。采用Envision試劑盒行二步法免疫組化染色。石蠟切片脫蠟至水,檸檬酸緩沖液微波高檔抗原修復(fù)25分鐘,雙蒸水沖洗3次,PBS沖洗3次,每次3分鐘；過(guò)氧化氫酶阻斷液微波低檔孵育3分鐘,清除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性,雙蒸水沖洗3次,PBS沖洗3次,每次3

4、分鐘；滴加VEGF、EGFR和Ki-67一抗,電熱恒溫培養(yǎng)箱37℃孵育1小時(shí),PBS沖洗3次；滴加酶標(biāo)羊抗鼠IgG聚合物二抗試劑,培養(yǎng)箱中37℃孵育30分鐘,PBS漂洗3次:室溫下DAB試劑顯色約5分鐘(3-10分鐘),自來(lái)水沖洗后蘇木素輕度復(fù)染約1分鐘,鹽酸酒精分化約6秒,酒精脫水、二甲苯透明后中性樹(shù)膠封固切片。染色可疑者即行重新標(biāo)記染色。以PBS取代一抗作陰性對(duì)照,以已知陽(yáng)性反應(yīng)片作陽(yáng)性對(duì)照。
　　 根據(jù)陽(yáng)性和陰性對(duì)照的顯色

5、情況,在確定無(wú)假陽(yáng)性和假陰性的前提下VEGF染色乳腺癌細(xì)胞胞漿,呈棕褐色；EGFR染色乳腺癌細(xì)胞胞膜和(或)胞漿；Ki-67染色乳腺癌細(xì)胞胞核,以胞核內(nèi)有棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞,凡胞漿有棕黃色著色的不計(jì)入陽(yáng)性細(xì)胞內(nèi),而作為陰性處理。低倍鏡下分別選取陽(yáng)性細(xì)胞最密集區(qū),然后在高倍視野下計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞。VEGF陰性為<25％細(xì)胞漿內(nèi)著色,弱表達(dá)(細(xì)小顆粒狀)；25％～50％細(xì)胞漿內(nèi)著色,弱表達(dá)(細(xì)小與較粗大顆粒狀并存)為(+)；51％～75％細(xì)胞

6、漿內(nèi)著色,中等表達(dá)(較粗大顆粒狀)為(++)；>75％細(xì)胞漿內(nèi)著色,強(qiáng)表達(dá)(細(xì)胞漿內(nèi)彌漫著色)為(+++)。EGFR陰性為無(wú)陽(yáng)性結(jié)果表達(dá)或非特異著色；大于10％的區(qū)域有陽(yáng)性表達(dá),胞膜顯色不連續(xù)為(+)；大于10％的區(qū)域有陽(yáng)性表達(dá),胞膜顯色連續(xù),但未形成完整的細(xì)胞膜形態(tài),強(qiáng)度中等為(++)；大于10％的區(qū)域有陽(yáng)性表達(dá),胞膜呈連續(xù)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),細(xì)胞膜形態(tài)完整為(+++)。Ki-67當(dāng)陽(yáng)性癌細(xì)胞計(jì)數(shù)<10％為陰性,≥10％而≤25％為“+”,>

7、25％而≤50％為“++”,>50％為“+++”,≥10％定為陽(yáng)性表達(dá),其中≥25％定為過(guò)度表達(dá)。
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,組間差異性比較采用四格表或行列表卡方檢驗(yàn),兩因素相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析,相關(guān)系數(shù)用r表示,以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：1.TNM分期及病理分型按照AJCC第六版方法,青年組中Ⅰ期乳腺癌為11例,Ⅱ期為39例;Ⅲ及Ⅳ期乳腺癌為17例

8、；中老年組分別是21例、252例、137例。青年組Ⅰ期乳腺癌比例顯著高于中老年組(x 2=11.741,P=0.001),Ⅱ期(x2=0.256,P=0.613)和Ⅲ、Ⅳ期(x2=1.703,P=0.192)乳腺癌相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。青年組浸潤(rùn)性導(dǎo)管痛46例,浸潤(rùn)性小葉痛8例,髓樣癌3例,粘液腺癌7例,導(dǎo)管內(nèi)癌3例；中老年組浸潤(rùn)性導(dǎo)管痛353例,浸潤(rùn)性小葉痛21例,髓樣癌例13,粘液腺癌13例,乳頭Paget病4例,小管癌4例及大汗

9、腺癌2例。青年組與中老年組在病理學(xué)分型上有明顯區(qū)別,中老年組以浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌居多(x2=12.807,P=0.000),而青年組以浸潤(rùn)性小葉痛(x2=4.689,P=0.048)及其它類(lèi)型癌居多(x2=7.050,P=0.008),差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。青年組腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率68.66％(46/67),中老年組為62.20％(255/410)。其中青年組1～3個(gè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移占20.90％,轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)≥4個(gè)占47.76％,中老年組分別為34.88

10、％、27.31％。在轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)數(shù)目1-3、≥4個(gè)組分別比較中,青年組與中老年組有顯著差異,青年組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移≥4的患者明顯多于中老年組(X2=11.421,P=0.001),后者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移3個(gè)以下者較多(X2=5.099,P=0.024)。
　　 2.免疫組化顯示青年乳腺癌患者VEGF、EGFR和Ki-67陽(yáng)性率分別為61.19％(41/67)、64.18％(43/67)和73.13％(49/67)。中老年組VEGF、EGFR和K

11、i-67陽(yáng)性率分別為41.46％(170/410),40.24％(165/410)和58.78％(241/410)。青年組VEGF(x2=9.089,P=0.003)、EGFR(x2=13.416,P=0.000)和Ki-67(X2=4.978,P=0.026)的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于后者,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.青年組和中老年組TNM分期與VEGF表達(dá)相關(guān)度高(r=0.392,P=0.001；r=0.227,P=0.000

12、),與EGFR亦存在相關(guān)性(r=0.444,P=0.000；r=0.274,P=0.000),與Ki-67的相關(guān)度亦高(r=0.402,P=0.001；r=0.116,P=0.019)；隨TNM分期的增加,青年組與中老年組VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸增高,各組間有顯著性差異(X2=11.914,P=0.003；X2=21.207,P=0.000)；兩組EGFR的陽(yáng)性表達(dá)率亦逐漸增高,各組間差異顯著(X2=13.264,P=0.001；X2=

13、30.871,P=0.000)；青年組與中老年組Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率也逐漸升高,各組間有顯著性差異(X2=10.837,P=0.004；X2=18.106,P=0.000)。隨著TNM分期增加,三者陽(yáng)性表達(dá)率顯著升高。
　　 4.青年組與中老年組VEGF表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目呈正相關(guān)(r=0.360,P=0.003;r=0.288,P=0.000),兩組EGFR表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目亦存在相關(guān)性(r=0.276,P=0.0

14、24；r=0.199,P=0.000),青年組與中老年組Ki-67表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目也呈正相關(guān)(r=0.343,P=0.004；r=0.422,P=0.000)；隨者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目的增多,VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸增高,在青年組與中老年組各組間有顯著性差異(X2:8.678,P=0.013；X2=34.815,P=0.000)；EGFR的陽(yáng)性表達(dá)率亦逐漸增高,在青年組與中老年組各組間有顯著性差異(X2=6.103,P=0.047；X

15、2=17.052,P=0.000),Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)率也逐漸增高,在青年組與中老年組各組間有顯著性差異(X2=7.985,P=0.018；X2=83.035,P=0.000)。隨著腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目的增多,三者陽(yáng)性表達(dá)率顯著升高。
　　 結(jié)論
　　 1.青年乳腺癌患者的臨床病理及生物學(xué)特征的提示,青年乳腺癌患者具有侵襲性強(qiáng),進(jìn)展快,復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移早,預(yù)后差的特點(diǎn)；
　　 2.青年乳腺癌在病理學(xué)表現(xiàn)獨(dú)特,其侵襲性強(qiáng),預(yù)

16、后差可能與癌組織中VEGF、EGFR.和Ki-67的高表達(dá)有關(guān)；
　　 3.測(cè)量乳腺癌組織中VEGF、EGFR和Ki-67的表達(dá)情況對(duì)判斷乳腺癌預(yù)后及指導(dǎo)治療有一定的參考意義。
　　 青年乳腺癌患者的生物學(xué)特征的分布有一定規(guī)律可循,可作為制定綜合治療方案的依據(jù),對(duì)判定預(yù)后有一定指導(dǎo)意義。臨床工作中,對(duì)具有不良的病理學(xué)及生物學(xué)特征的青年乳腺癌患者,爭(zhēng)取早期診斷,精設(shè)計(jì)治療方案,重視全身治療,可望改善其生存率。對(duì)青年乳腺癌的