乳腺癌內(nèi)分泌治療敏感性調(diào)節(jié)研究.pdf

1、乳腺癌細胞內(nèi)分泌治療敏感性調(diào)節(jié)的研究 復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院乳腺外科 博士研究生范江導(dǎo)師沈鎮(zhèn)宙教授研究目的 應(yīng)用DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑AZA聯(lián)合組蛋白去乙?；敢种苿㏕SA作用于乳腺癌細胞株MDA-MB-435，研究是否能夠通過這兩種藥物誘導(dǎo)雌激素受體陰性乳腺癌細胞株MDA-MB-435重新表達功能性的雌激素受體Q，并探討經(jīng)過藥物誘導(dǎo)重新表達雌激素受體Q后其生物學(xué)特性的變化以及對于內(nèi)分泌治療的敏感性的改變。

2、 材料與方法 1．聯(lián)合應(yīng)用AZA(5-aza-2’deoxycytidine)；TSA(trichostatinA)與作用于乳腺腫瘤細胞MDA-MB一435，應(yīng)用RT-PCR的方法檢測MDA-MB-435細胞株ERQ，PR以及PS2的mRNA表達水平的改變。 2．通過WST方法來檢測乳腺癌細胞的增殖能力變化，將MDA-MB-435細胞根據(jù)藥物處理共分四組：①對照組②AZA+TSA③AZA+TSA+4—0HTAM組④4—0

3、HTAM組。同時分析誘導(dǎo)后的MDA-MB一435在不同雌激素濃度中的增殖能力。 3．將MDA-MB-435分為六組，分別以AZA濃度梯度為Oumol／L；1umol／L；2．5umol／L：5umol／L；10umol／L；20umol／L聯(lián)合TSAl00ng／ml六個處理組來誘導(dǎo)MDA-MB-435細胞株。藥物處理96小時后以WST法來測定腫瘤細胞增殖能力的變化。并且測定聯(lián)合4-OHTAM作用后MDA-MB-435的增殖能力情

4、況。 4．采用流式細胞儀來分析腫瘤細胞周期分布的改變，將MDA-MB-435分成另外四組：①對照組②AZA+TSA③AZA+TSA+E2組④AZA+TSA+E2+4—0HTAM組。 5．建立人乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型，將MDA-MB-435分為三組①對照組②AZA+TSA③AZA+TSA+卵巢切除組以進一步驗證藥物誘導(dǎo)后的腫瘤細胞的成瘤能力以及對于雌激素水平的依賴性。 研究結(jié)果 1．TSA以及AZA聯(lián)合應(yīng)

5、用能使腫瘤細胞MDA-MB-435重新恢復(fù)ERQ，PR以及PS2的mRNA表達。 2．增殖分析的四個組中：第②組AZA+TSA細胞增殖能力較對照組減弱(p(O．01)。第③組AZA+TSA+4-OHTAM增殖能力進一步減弱(p

6、AZA濃度梯度的增殖能力測定中在本試驗中觀察到在誘導(dǎo)濃度為AZA2．5umol／L、TSA為lOOng／ml時聯(lián)合4-OHTAM時MDA-MB一435增殖能力下降最明顯。 4．細胞周期流式細胞儀分析的四個組中：第②組經(jīng)過AZA聯(lián)合TSA聯(lián)合誘導(dǎo)后的MDA-MB-435出現(xiàn)顯著的S期阻滯(73．84±0．22％)；第③組：AZA+TSA誘導(dǎo)后并加入雌激素后細胞阻滯稍減弱(62．¨±O．18％)。第④組(AZA+TSA+E2+4-O

7、HTAM)AZA+TSA誘導(dǎo)后并加入雌激素并且同時加入4—0HTAM組中細胞S期阻滯再次提高(77．13±0．31％)。 5．體內(nèi)試驗：誘導(dǎo)處理后的MDA-MB-435之移植瘤在體內(nèi)較未經(jīng)處理的細胞增殖能力下降(p