ⅣfimA型牙齦卟啉單胞菌重組菌毛對血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響.pdf

1、目的：觀察ⅣfimA型牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas gingivalis，P.gingivalis）重組菌毛蛋白rFimA對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）表達和分泌致炎細(xì)胞因子、粘附分子和趨化因子的影響，探討P.gingivalis及其菌毛蛋白FimA在動脈粥樣硬化（atherosclerosis，As）發(fā)生發(fā)展中的可能作用以及作為牙周炎與

2、As相關(guān)的物質(zhì)基礎(chǔ)的可能。
　　 方法：標(biāo)準(zhǔn)條件下厭氧培養(yǎng)Ⅴ fimA型P.gingivalis（W83），收集菌液提取細(xì)菌DNA，克?、鬴imA型P.gingivalis（W83）的fimA序列，構(gòu)建fimA的原核表達系統(tǒng)pET-30a-FimA BL21DE3，IPTG誘導(dǎo)表達重組菌毛蛋白rFimA；體外培養(yǎng)HUVEC，待HUVEC單層融合后，分別加入純化后不同濃度的Ⅳ型rFimA，共同培養(yǎng)2h、6h、24h，采用ELISA

3、法測定培養(yǎng)上清液中致炎細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和趨化因子IL-8、MCP-1的分泌量；RT-PCR檢測HUVEC中各致炎細(xì)胞因子和趨化因子以及粘附分子ICAM-1和VCAM-1的mRNA表達水平；FCM檢測HUVEC表面粘附分子ICAM-1和VCAM-1的蛋白表達量。
　　 結(jié)果：（1）不同濃度Ⅳ型rFimA蛋白刺激HUVEC，ICAM-1的mRNA水平T5組（10.0μg/ml）在2h、6h、24h時均能刺激其

4、表達，隨時間推移，表達強度有升高趨勢，但該濃度組在各時間點分泌的蛋白量與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，與基因表達水平不一致；VCAM-1蛋白表達與基因水平相符，在2h時各濃度組均不能刺激其表達，隨時間延長，各濃度組刺激表達的能力逐漸增強，6h時T5組、24h時T3、T4、T5組與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示這種刺激作用存在時間依賴性；6h、24h時隨濃度增加，刺激表達的能力亦有增強趨勢。（2）不同濃度Ⅳ型rFimA蛋白刺激HUVEC2

5、h、6h、24h時，IL-1β和IL-6 mRNA水平和蛋白水平與對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，說明其表達對Ⅳ型rFimA不敏感，不能誘導(dǎo)其增強；TNF-αmRNA在2h未見其有表達，6h、24h時，各濃度組刺激表達的能力逐漸增強，6h時T5組及24h時T2、T3、T4、T5組都能刺激TNF-α的表達，提示這種刺激作用存在時間依賴性。分泌蛋白量與mRNA水平基本一致，但是24h時T2、T3兩個濃度組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。（3）不

6、同濃度Ⅳ型rFimA蛋白刺激HUVEC，MCP-1和IL-8 mRNA表達水平隨時間延長，各濃度組刺激表達的能力逐漸增強，作用具有時間依賴性；24h時MCP-1和IL-8 mRNA表達具有劑量依賴性，MCP-1和IL-8在各時間點蛋白表達量與基因水平基本一致，但24h時MCP-1和IL-8蛋白表達量不具有劑量依賴性。
　　 結(jié)論：本研究結(jié)果顯示Ⅳ型rFimA蛋白能刺激粘附分子VCAM-1、致炎細(xì)胞因子TNF-α和趨化因子MCP-