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文檔簡介
1、本研究設(shè)計了一對引物，應(yīng)用PCR方法從芽孢桿菌Bacillus sp.WS06構(gòu)建的全基因組DNA文庫中擴增了α-淀粉酶基因amyF，并將其克隆到原核表達載體pET-21a中，成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pETAF，在大腸桿菌BL21(DE3)中獲得了較高表達。推測amyF編碼的蛋白有526個氨基酸、分子量為58.6 kD；amyF基因經(jīng)核苷酸序列測定，與已報道的Bacillus megaterium的α-淀粉酶基因序列有著93％的同源性。經(jīng)氨基
2、酸序列比較分析發(fā)現(xiàn)，AmyF含有淀粉酶家族中四個高度保守的酶催化活性區(qū)。經(jīng)多步純化后，達到電泳純的重組酶的比活比粗酶液提高了22.2倍，獲得凝膠電泳均一的蛋白樣品；經(jīng)SDS-PAGE電泳測定，AmyF酶分子量為57kD。為了進一步研究抗性淀粉在腸道中微生物發(fā)酵與淀粉酶的關(guān)系，設(shè)計了抗性淀粉的動物飼喂試驗，收集結(jié)腸末端內(nèi)容物，洗滌獲得混合菌體，簡單模擬腸道內(nèi)環(huán)境，體外厭氧恒溫培養(yǎng)，采樣測定分析相關(guān)指標。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著抗性淀粉攝入水平的增加
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