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1、該研究擬利用分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建雞CaBP-D28k的真核表達(dá)質(zhì)粒,在雞體內(nèi)進(jìn)行表達(dá)并以此來(lái)對(duì)禽體內(nèi)鈣的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控機(jī)制進(jìn)行研究,并進(jìn)一步尋找利用基因注射來(lái)解決生產(chǎn)中由于鈣的營(yíng)養(yǎng)不足而引起的各種缺乏病的可行性.該研究是對(duì)CaBP-D28k作用的初步探討,旨在為CaBP-D28k的進(jìn)一步研究、開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ),通過(guò)RT-PCR的方法從蛋雞小腸組織RNA擴(kuò)增出789bp完整的雞CaBP-D28kcDNA.通過(guò)TA克隆,我們將所擴(kuò)增的cDNA克隆入載體
2、pGEM-T內(nèi),經(jīng)酶切和PCR初步鑒定后,再測(cè)定分析其序列的正確性.為了驗(yàn)證克隆的雞CaBP-D28k cDNA的編碼情況,該研究通過(guò)將雞CaBP-D28k cDNA亞克隆入真核表達(dá)載體pCEP4內(nèi),構(gòu)建了真核表達(dá)構(gòu)件pCEP4-CaBP-D28k,用所獲得的真核表達(dá)構(gòu)件pCEP4-CaBP-D28k轉(zhuǎn)染COS-1細(xì)胞,進(jìn)行暫態(tài)表達(dá),用免疫熒光法檢測(cè)到表達(dá)產(chǎn)物.用真核表達(dá)構(gòu)件pCEP4-CaBP-D28k注射老年蛋雞,經(jīng)血液中降鈣素、甲
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