NDV F基因和胸腺五肽基因真核共表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與應(yīng)用.pdf

1、核酸疫苗是通過基因重組手段將編碼某種抗原蛋白質(zhì)的基因與載體重組后直接導(dǎo)入動物體內(nèi)，在宿主體內(nèi)表達(dá)抗原從而引起機體免疫應(yīng)答的新型疫苗，是一種與傳統(tǒng)疫苗截然不同的新型疫苗，被譽為第三代疫苗。新城疫(ND)一直是危害我國養(yǎng)禽業(yè)的重要病毒性傳染病，雖然預(yù)防這種疫病的弱毒疫苗早已研制成功并得到廣泛應(yīng)用，但由于受母源抗體等因素的干擾，常常發(fā)生免疫失敗。核酸疫苗的誕生，給基因治療和免疫學(xué)領(lǐng)域帶來了不可估量的前景。它可誘導(dǎo)細(xì)胞免疫并可抵抗母源抗體干擾，

2、但核酸疫苗在誘導(dǎo)免疫應(yīng)答中的效率還相對較低，影響了它的實際應(yīng)用。近幾年來，胸腺五肽作為一種免疫調(diào)節(jié)劑，已被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)臨床，在獸醫(yī)臨床的防治試驗中也取得了一定的效果。為了進(jìn)一步加強NDV核酸疫苗的免疫功效，本論文進(jìn)行了胸腺五肽基因與NDV F基因真核共表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其免疫原性檢測的研究。 本論文根據(jù)GeneBank收錄的新城疫病毒(NDv)F基因序列，設(shè)計一對特異性引物，其中上游引物含有胸腺五肽(Thymopentin，TP

3、-5)的基因序列。以NDV Z株F基因的重組質(zhì)粒為模板，進(jìn)行PCR擴增，其產(chǎn)物與真核表達(dá)載體pcDNA3.1/V5-His-TOPO重組，陽性克隆經(jīng)PCR擴增和核酸內(nèi)切酶酶切鑒定準(zhǔn)確無誤，核酸序列測定結(jié)果與原始基因比較，同源性>99％，啟始密碼子和終止密碼子未出現(xiàn)變異，將該重組質(zhì)粒命名為pcDNATP-5NDVZF。將pcDNATP-5NDVZF在脂質(zhì)體作用下轉(zhuǎn)染CEF細(xì)胞，用間接免疫熒光試驗(IFA)檢測，結(jié)果證明pcDNATP-5N