小反芻獸疫病毒H基因與IFN-γ基因共表達質(zhì)粒的構(gòu)建.pdf

1、小反芻獸疫是由小反芻獸疫病毒引起的一種急性、烈性、接觸性傳染病，因危害嚴重被世界衛(wèi)生組織列為A類傳染病。2007年我國首次報道發(fā)生PPR疫情，PPR疫情在我國周邊國家及境內(nèi)的不斷發(fā)生對我國動物疫病的防控提出了新的要求，對PPR的診斷和預防成為研究熱點。 本實驗選取了小反芻獸疫病毒H作為免疫原基因，并以共刺激分子IFN-γ基因為佐劑基因來構(gòu)建真核表達載體，利用BHK-21細胞、小鼠作為模型研究核酸疫苗在BHK-21細胞中表達、誘導

2、小鼠體液免疫和細胞免疫的能力、IFN-γ的免疫增強作用，獲得如下結(jié)果： 1.小反芻獸疫H基因真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建及在BHK-21細胞中表達：小反芻獸疫H基因的克隆，本研究對小反芻獸疫H基因進行pGEM-T載體克隆與測序。通過NotⅠ和xholⅠ雙酶切，定向粘末段連接法，用pBudce4.1載體構(gòu)建了真核表達載體pBud-H和pBud-IFN-γ/H。用脂質(zhì)體法將pBud-H和pBud-IFN-γ/H分別轉(zhuǎn)染BHK-21細胞，通過熒

3、光抗體檢測，目的基因在BHK-21細胞中獲得了表達。 2.核酸疫苗誘導小鼠體液和細胞免疫的研究：pBud-H和pBud-IFN-γ/H分別免疫4周齡雌BALB/c小鼠，2周后加強免疫一次，每周用ELISA檢測小鼠血清中的抗體水平，隔周用MTT法檢測小鼠脾淋巴細胞的增殖反應(yīng)，結(jié)果表明DNA疫苗均可有效引發(fā)機體產(chǎn)生體液免疫和細胞免疫，而且pBud-IFN-γ/H的免疫產(chǎn)生的抗體水平以及細胞免疫水平都比pBud-H要高，結(jié)果表明，小反