廣西十種優(yōu)質(zhì)品種雞IFN-γ和IL-2基因的克隆及IFN-γ表達(dá)與活性研究.pdf

1、γ-干擾素(IFN-γ)和白細(xì)胞介素-2(IL-2)是雞體內(nèi)重要的細(xì)胞因子，在雞抗病和免疫應(yīng)答反應(yīng)中占有重要地位。本研究首次將廣西十種優(yōu)質(zhì)品種雞外周血淋巴細(xì)胞在刀豆蛋白A(Con A)的刺激下體外培養(yǎng)16h后，提取淋巴細(xì)胞總RNA，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增出雞IFN-γ和IL-2的cDNA，克隆到pMD18-T載體上并測(cè)序。測(cè)序結(jié)果顯示：廣西十種優(yōu)質(zhì)品種雞Y一干擾素基因都編碼145個(gè)氨基酸的成熟蛋白，分子量約為16.8kD，與哺乳動(dòng)物和

2、其他品種雞核苷酸序列的同源性分別為38.8％-40.6％、99.2％-100％，氨基酸的同源性為23.6％-29.1％、97.6％-99.4％，克隆的雞白細(xì)胞介素2基因都編碼143個(gè)氨基酸的成熟蛋白，分子量約為16.3kD，與哺乳動(dòng)物和其他品種雞核苷酸序列的同源性分別為25.2％-30.3％、98.6％-99.8％，氨基酸的同源性為14.6％-16.7％、96.5％-99.3％．為了克隆編碼IFN-γ成熟蛋白基因，設(shè)計(jì)一對(duì)引物，將雞IF

3、N-γ插入pGEX-4T-1載體上，構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-mIFN-γ，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，以EcoRI和Sa／I雙酶切篩選鑒定轉(zhuǎn)化子，用IPTG誘導(dǎo)融合蛋白表達(dá)。通過SDS-PAGE和Westernblot分析，發(fā)現(xiàn)pGEX-m IFN-γ在42.4kD處出現(xiàn)融合蛋白條帶，證實(shí)雞IFN-γ基因得到了正確轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。首次采用F48E9 NDV標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株，測(cè)定IFN-γ蛋白抗病毒的活性為1.33×10<'4>U／ml，深入研究I