轉基因三倍體毛白楊外源基因及其表達的檢測.pdf

1、三倍體毛白楊是近年來中國大力推廣的速生樹種之一.隨著栽培面積的不斷擴大,多種食葉害蟲的危害越來越嚴重.利用轉基因技術培育抗蟲楊樹新品種已成為當前植物遺傳改良的重要手段.河北農業(yè)大學林業(yè)生物技術實驗室已經將構建在一個載體上的雙抗蟲基因(BtCrylAc基因和API基因)對三倍體毛白楊進行了遺傳轉化,該研究主要從分子生物學檢測、外源基因表達的檢測、外源基因表達規(guī)律及相互關系、工程農桿菌安全性這五個方面對轉基因三倍體毛白楊進行了分析,以期獲得

2、轉雙抗蟲基因三倍體毛白楊高抗株系.1根據(jù)PCR檢測結果可知,在轉基因三倍體毛白楊42個系號中,有33個系號檢測到Bt-API基因,陽性率達到80％.Southern雜交分析得出,Bt基因已成功整合到轉基因三倍體毛白楊中,且各系號轉入的外源基因均為一個拷貝.2經過抗蟲性初步篩選,其中有11個高抗系號,占所有參試系號的39.3%;7個中抗系號,占所有參試系號的25.0%;10個低抗系號,占所有參試系號35.7%.各無性系對所測試昆蟲均有抗性

3、,經楊扇舟蛾和舞毒蛾劃分的高抗、中抗系號高度一致.各無性系抗蟲性主要表現(xiàn)為對低齡幼蟲的毒殺作用,對存活的高齡幼蟲的生長發(fā)育有明顯抑制作用,從而導致幼蟲生長發(fā)育不良,甚至死亡.對幼蟲體重、體長、糞重和取食量進行了分析,發(fā)現(xiàn)高抗和中抗系號的飼養(yǎng)的幼蟲體重、體長、糞重和取食量明顯小于未轉基因對照,低抗系號與未轉基因對照相近或高于對照.通過對無性系5號、6號、47號飼養(yǎng)的幼蟲體重和糞重的分析,證明三個系號具有較強的殺蟲作用,且隨天數(shù)的增加,幼蟲

4、的生長發(fā)育受到了一定程度的抑制.各無性系抗蟲性具有明顯的穩(wěn)定性,2002年和2003年的抗蟲規(guī)律基本一致.表明Bt-API雙抗蟲基因在轉基因植株中較穩(wěn)定,兩種參試昆蟲并未對轉基因植株產生抗性.通過對ELISA檢測的結果與抗蟲性結果進行相關性比較發(fā)現(xiàn),高抗的系號毒蛋白表達量較高,中抗系號的次之,低抗系號的毒蛋白表達量幾乎沒有.3轉基因組培苗卡那霉素篩選作為外源基因檢測的一種手段是有效的,但并不能反映轉基因單株的真實抗性,因此不能作為最終的