家蠶轉(zhuǎn)基因的外源基因?qū)敕ㄑ芯?pdf

1、西南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文家蠶轉(zhuǎn)基因的外源基因?qū)敕ㄑ芯啃彰汗阊笊暾垖W(xué)位級別：碩士專業(yè)：特種經(jīng)濟(jì)動物飼養(yǎng)指導(dǎo)教師：周譯揚(yáng)20000501有陽性的卵圈保留繼代。2同源墮繃嘲啡pTRS41N的陶蜮斑翩靳蝽馳啪Ii圣母入21同潦尉圓翩燃pTR54IN撇本實(shí)驗(yàn)設(shè)計引物特異擴(kuò)增家蠶轉(zhuǎn)座子中度重復(fù)序列TRASl開放閱讀框前的兩個片段，即321bp838bp和]50ltxpq9]]Ip，作為含有家蠶核型多角體病毒NPV立即早期(ImmediateE

2、arlyIE)蛋白啟動子刺的新霉素抗性基因耐的載體piN表謐兩端的同源重組臂，得到用于家蠶轉(zhuǎn)基因的同源重組轉(zhuǎn)座載體pTR541N。址期確醛爆柏瞰刪瑟融黼以基因槍法分20次向約10000粒產(chǎn)下2小時內(nèi)的受精卵轟擊，導(dǎo)入線性化質(zhì)粒pTe54IN導(dǎo)入后的蠶卵孵化飼養(yǎng)、檢測。23轉(zhuǎn)趨團(tuán)尉鼬啕潯鈾粼在GO代轉(zhuǎn)基因個體中檢測到了對所導(dǎo)入的基因ned的PCR陽性擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物得到S0tnl黜uI瓶Ilg驗(yàn)證：GI代卵圈各取1／4提取DNA做P(R檢測

3、，得到兩個陽性卵圈，保種。本實(shí)驗(yàn)必精子介導(dǎo)法向蠶卵導(dǎo)^所建屈骷pFbGFP，曰鷲封晰弋從基因組DNA檢測到所導(dǎo)，M卜濺因斫，的PCR、Southern雜交陽性，其中—種導(dǎo)入力式到熙二代陽性率為400。說明精予介導(dǎo)法用于外源基因向家蠶的導(dǎo)入是可行的。我們特異擴(kuò)增家蠶轉(zhuǎn)座子、中度重復(fù)序列TRASl嬲謝韻拍兩個片l戮作為同醵重組引導(dǎo)序列構(gòu)建同源重朔醋座載體：以基因槍法導(dǎo)入載體同源臂以內(nèi)的線性片段，在G0代轉(zhuǎn)基因4體oe檢渙桎0了對所導(dǎo)入的基因