轉(zhuǎn)基因白樺外源基因的整合特性與表達(dá)穩(wěn)定性的研究.pdf

1、本文以溫室四年生轉(zhuǎn)抗蟲基因白樺(Betulaplatyphylla)為研究材料，提取葉片的基因組DNA和RNA，運用多重PCR，反向引物PCR，反向PCR和RT-PCR等方法，并結(jié)合轉(zhuǎn)基因白樺的喂蟲實驗，分別對轉(zhuǎn)基因白樺外源基因的整合特性和表達(dá)特性進行分析，所得結(jié)果如下： 1.確立多重PCR方法快速檢測轉(zhuǎn)抗蟲基因白樺外源基因的整合狀態(tài)的條件，為更深一步研究轉(zhuǎn)基因白樺外源基因整合特性的研究奠定基礎(chǔ)，同時證明多重PCR方法運用到轉(zhuǎn)基

2、因白樺外源基因整合檢測研究具有方便和快速的特點。 2.確定用反向引物PCR(RP-PCR)和正向引物PCR結(jié)合的方法研究轉(zhuǎn)抗蟲基因白樺外源基因T-DNA整合的拷貝數(shù)的條件，并結(jié)合Southern雜交確定外源基因T-DNA整合到宿主基因組上的拷貝數(shù)，對轉(zhuǎn)基因白樺整合的拷貝數(shù)進行分類。 3.利用改良的反向PCR(inversePCR)方法，克隆了12個轉(zhuǎn)基因白樺T-DNA旁側(cè)序列，并對旁側(cè)序列測序分析，初步揭示T-DNA整合