轉(zhuǎn)基因玉米中外源基因檢測(cè)方法的研究.pdf

1、自1983年首例轉(zhuǎn)基因作物問(wèn)世以來(lái)，在給人類帶來(lái)巨大福音的同時(shí)也帶來(lái)了潛在的風(fēng)險(xiǎn)，轉(zhuǎn)基因作物安全問(wèn)題也逐漸被人們重視。各國(guó)政府紛紛制定相關(guān)政策法規(guī)，要求對(duì)轉(zhuǎn)基因作物及其產(chǎn)品實(shí)施標(biāo)識(shí)管理制度。這些法規(guī)實(shí)施的前提就是要建立一套穩(wěn)定、準(zhǔn)確的轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)。本研究以轉(zhuǎn)基因玉米MON810為材料，在構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒的基礎(chǔ)上，建立了對(duì)MON810定性PCR和熒光定量PCR檢測(cè)方法，主要研究結(jié)果如下:
　　 1、為了獲得高質(zhì)量的基因組DNA，本研

2、究比較了多種提取玉米葉片組織和玉米種子基因組DNA的方法，并對(duì)其進(jìn)行了優(yōu)化，得到了玉米葉片組織和種子基因組DNA的最佳提取方法，進(jìn)而為在核酸方面檢測(cè)轉(zhuǎn)基因作物提供了依據(jù)。
　　 2、分別通過(guò)Tail-PCR和I-PCR的方法獲得了MON810的左邊界序列，比較了兩種方法的難易程度，Tail-PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程簡(jiǎn)單但結(jié)果分析繁瑣；I-PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程繁瑣但結(jié)果分析簡(jiǎn)單，從本文的實(shí)驗(yàn)情況來(lái)看，選擇I-PCR為獲得邊界序列的主要方法。

3、>　　 3、通過(guò)重疊延伸PCR的方法將MON810的左邊界序列mt及外源基因CaMV35S啟動(dòng)子、hsp70、cry1Ab連接成一個(gè)大片段，經(jīng)過(guò)純化，再將其連接到pMD18-T載體，最后通過(guò)雙酶切的方法將玉米內(nèi)標(biāo)基因SSⅡb連入同一載體，構(gòu)成適于MON810檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒pMD-MON810。
　　 4、根據(jù)MON810轉(zhuǎn)入的外源基因，設(shè)計(jì)了針對(duì)CaMV35S、hsp70和cry1Ab的引物，并且設(shè)計(jì)了針對(duì)左邊界序列和內(nèi)標(biāo)基因