新型轉基因標準物質與標記基因檢測方法研究.pdf

1、轉基因篩查體系包括轉基因檢測標準物質和轉基因檢測方法。轉基因篩查檢測標準物質是轉基因篩查體系的物質基礎，轉基因篩查檢測方法是轉基因篩查體系的技術基礎。
　　 鑒于制作基體型標準物質的轉基因材料很難獲得和質粒型標準物質容易污染檢測環(huán)境，而且價格昂貴，本研究嘗試研制一種既具有基體型標準物質和質粒型標準物質的優(yōu)點又克服它們缺點的新型標準物質。通過把含有植物轉基因通用元件以及油菜、玉米、水稻、甜菜、大豆和馬鈴薯的內標準基因的陽性質粒轉入

2、模式植物煙草，發(fā)展成為新型標準物質。用卡那霉素作為篩選選擇壓，獲得了擁有卡那霉素抗性的陽性煙草植株。研究顯示，轉基因煙草含有所有轉基因通用元件的檢測靶標序列，可以較好充當轉基因檢測的陽性對照用于轉基因成分的篩查工作。
　　 本研究還分析了商業(yè)化轉基因品種的分子特征與元件分布，選取應用頻率高或在未來應用潛力大的標記基因NPTII、PAT、CP4-EPSPS、Bar、HPTII、GUS和PMI作為檢測靶標，建立了這7個基因的普通PC

3、R和實時熒光PCR檢測方法。
　　 本研究為轉基因成分檢測標準物質研制提供了一個全新的思路，首次研制成功基于轉基因煙草的轉基因篩查用標準物質，為克服現(xiàn)有標準物質的缺點提供了可能。本研究還在我國建立了篩選標記基因的PCR檢測標準化體系，該體系已成為國家檢測標準。
　　 本研究取得以下主要研究結果：
　　 1）克隆了6類農作物的10個內標準基因；
　　 2）成功構建包括11個轉基因通用元件和6類農作物的10個