豆類絲核菌次級代謝產(chǎn)物的生物效應(yīng)研究.pdf

1、摘要三摘要目的:篩選出生長穩(wěn)定，產(chǎn)生SW量大的優(yōu)良的豆類絲核菌菌株，為該菌進行發(fā)酵動力學(xué)研究奠定基礎(chǔ)，并獲得該菌在生長及形態(tài)上的系統(tǒng)鑒定資料同時研究該菌的次級代謝產(chǎn)物的抗腫瘤病理及免疫效應(yīng)，從而探索Sw的抗腫瘤應(yīng)用探索該菌或其次級代謝產(chǎn)物的動植物損害在細(xì)胞生物學(xué)上的關(guān)系，從而為SW的毒理學(xué)研究及腫瘤病理學(xué)研究提供新的研究思路。方法:①通過野外分離和保存菌株復(fù)活純化方法。獲得生長穩(wěn)定的豆類絲核菌，并進通過光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡進行形態(tài)學(xué)鑒定

2、，對不同菌株分別與標(biāo)準(zhǔn)菌和相互進行菌絲融合試驗。②將篩選分離的穩(wěn)定菌株用改良的Czapeks培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，獲得豆類絲核菌次級代謝產(chǎn)物，并通過氣相色譜法測定其苦馬豆素(SwainsonineSW)含量。③通過建立種植性肝癌(Hl)實體瘤動物模型，并給荷瘤小鼠灌胃含有SW且劑量分別為2.7mgkgd(II組)和16.2mgkgd(111組)的豆類絲核菌次級代謝產(chǎn)物稀釋液，分別于不同時間測定荷瘤鼠T淋巴細(xì)胞活化指數(shù)(S工)、腫瘤抑制率和腹腔

3、巨噬細(xì)胞吞噬百分率和剖檢荷瘤動物并取腫瘤組織與肝組織進行病理組織學(xué)和電鏡觀察。④制作豆類絲核菌次級代謝產(chǎn)物污染的飼料和人工污染豆類絲核菌飼料，飼喂家免17d，剖檢家兔并取其腦、肝臟、腎臟等組織分別進行病理組織學(xué)和電鏡觀察同時將不同濃度的次級代謝產(chǎn)物和不同株的豆類絲核菌分別污染回接的綠豆，待84h培養(yǎng)后。分別進行組織學(xué)和電鏡觀察。結(jié)果與小結(jié):①獲得6株生長穩(wěn)定的菌株，且6株菌屬于同一菌種的不同融合群，均具有豆類絲核菌的形態(tài)特征，屬于豆類絲

4、核菌，其產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物中含有大量的SW0268和023A代謝產(chǎn)生的Sw較高‘分別達到1093.17mgL‘和1199.64mg。Le②在抗腫瘤試驗中，II組Si在Sd時顯著升高，明顯高于對照組(1組》的1.33310.053，達到1.670士0.527(P0.05)e111組荷瘤動物腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率在灌藥后8d時也顯著高于腫瘤對照組(I組)的腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率(P0.05).達到33.99土1.56%.11、III兩組腫瘤抑制率8

5、d時分別為26.44%和33.91%16d時分別為46.98%和4724%.II組與III組在816d時腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)大量且嚴(yán)重的脂肪變性及大面積壞死，且壞死區(qū)呈網(wǎng)絡(luò)狀，將瘤組織分割成小的瘤細(xì)胞團.表明該次級代謝產(chǎn)物能夠使荷瘤動物細(xì)胞免疫應(yīng)答增強，并能抑制種植性實體瘤(Hn)的生長和轉(zhuǎn)移其中含SWl6.2mgkgd劑It標(biāo)準(zhǔn)的次級代謝產(chǎn)物對荷瘤動物的免疫增強作用與抗腫瘤作用明顯。③在對動植物細(xì)胞損容作用中，豆類絲核菌次級代謝產(chǎn)物使家兔腦組

6、織和淋巴細(xì)胞豆類絲核菌次級代謝產(chǎn)物的生物效應(yīng)研究空泡變性，神經(jīng)細(xì)胞核糖體脫顆粒，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張等同時能使植物根部組織結(jié)構(gòu)受損，細(xì)胞空泡變性，內(nèi)膜破裂等。由此表明，豆類絲核菌引起的動物中毒作用主要是其次級代謝產(chǎn)物中SW發(fā)揮毒性，且同瘋草中毒引起的病理變化基本一致:菌株對植物根部的致病性與其次級代謝產(chǎn)物中SW含量呈正相關(guān)。即推測，SW很有可能不僅是動物豆類絲核菌中毒的主要毒素，而且是豆科植物絲核菌病中細(xì)胞損害的主要化學(xué)物質(zhì)。關(guān)鍵詞:豆類絲核

7、菌次級代謝產(chǎn)物苦馬豆素腫瘤:毒性TheStu即onbiologyEfectsofSecondaryMetabolitesofRhizoctoniaLeguminicolaPostgraduate:ZhangLiSupervisor:YangMingqi(CollegeofAnimalScienceandTechnologyNorthwestSciTechUniversityofAgricultureandForestryYangling

8、ShaanxiChinaP.R712100)AbstractJu句ect:Ytcxupstrainsofxmzociontaiegumiwcoiamatcanprouuctlargeamountsofswainsonine(SW)andgrowstably.ThisworkcanestablishthefoundationforzymologystudyonthestrainsofRhizoctonialeguminicola.Weca

9、nalsoacquirethesystemicidentificationdatumofthevegetalandmodalcharacterandstudytheantitumorefectsofpathologyandimmunologyinthebodyofanimalbythesecondarymetabolitesofRhizoctoniaLeguminicola.Therebywecouldknowthereasonofan

10、titumorbySW.AtlastwecouldexploredamageefectandcytobiologyrelationshipofanimalandplantcellbyRhizoctonialeguminicolaanditssecondarymetabolites.Allthesecanprovidenewthoughtfulnessforthestudyontumorpathologyandtoxicology.Met

11、hod:①BywayofstrainsseparationpurificationrevivalofthisepiphyteinfieldandtheRhizoctonialeguminicolahadbeenkeptinourlabsince1997respectivelywecouldgetsomestrainsofgrowthstablythenmodalcharacteridentificationhadbeenprocesse

12、dbyopticsmicroscopeandSEMandtheexperimentationofhyphaamalgamationhadbeendonetodistinguishdiferentamalgamationgroups②ThestablestrainswasculturedbyimprovedC7apeksculturemediumandthesecondarymetabolitesofRhizoctoniaLegumini