列當高效生防菌的篩選及其防治機理研究.pdf

1、目的：寄生性雜草列當在新疆很多地區(qū)均有發(fā)生，給當?shù)毓芄稀⒓庸し?、向日葵、打瓜等重要?jīng)濟作物造成嚴重損失。為了防治列當危害，篩選出對列當強致病的生防菌株并明確其防治機理，為列當?shù)挠行Х乐翁峁┘夹g支持。
　　方法：本研究從新疆列當發(fā)生區(qū)采集地上部萎蔫、莖基部變色及自然死亡的列當病樣進行了采集、分離和初步鑒定，為新疆列當生物防治提供菌種來源。通過離體接種、盆栽試驗、小區(qū)試驗和大田試驗測定致病菌對列當?shù)姆乐涡Ч徊⒉捎眯螒B(tài)學和分子生物

2、學方法對致病性較強的菌株進行了鑒定，并對其進行單因素篩選和發(fā)酵工藝優(yōu)化的研究；對生防菌株毒素的提取和初步鑒定，采用了高效液相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）方法分析，明確高效生防菌的除草活性物質(zhì)。
　　結果:1、采集了1000株列當病樣，通過分離共獲得526個分離物。在526個分離物中，鐮刀菌294個，占分離總數(shù)的55.89％；絲核菌153個，占29.09%；腐霉菌45個，占8.56%；其他34個，占6.46%。鐮刀菌、絲核菌

3、、腐霉菌是新疆地區(qū)列當?shù)闹饕虏【?。?jīng)過離體接種得出引起列當?shù)陌l(fā)病最強的是腐霉菌，其次是鐮刀菌，最弱的是絲核菌。通過盆栽試驗和小區(qū)試驗結果分析得出8株致病性較強的致病菌，即4株腐霉菌HN4-0、HN2-0、HN12930B和FU-0和4株鐮刀菌KS7-2、KS3-3、KT-10和BT1883c。其中腐霉菌HN4-0的致病力最強，HN2-0和FU-0次之，HN12930B的致病力相對較弱；鐮刀菌KS7-2和KS3-3的致病力強，KT-10

4、和BT1883c的致病力相對較弱。
　　2、通過3株腐霉菌的生物學特性、菌落形態(tài)特征及藏卵器、雄器和孢子囊的形態(tài)檢測，并參照余永年編寫對腐霉菌的描述初步確定菌株HN4-0和HN2-0為瓜果腐霉，F(xiàn)U-0為終極腐霉。通過4株鐮刀菌的菌落形態(tài)、大小孢子形態(tài)及產(chǎn)孢方式、厚垣孢子的形態(tài)特征，并參照王拱辰的方法初步確定KS7-2和KS3-3為茄病鐮孢，KT-10為尖孢鐮孢，BT1883c為F.cerealis。并采用18SrDNA的ITS區(qū)

5、序列分析，與形態(tài)學鑒定結果相同。
　　3、通過對生防菌株HN4-0進行單因素篩選和發(fā)酵工藝優(yōu)化的研究，明確了其生長最適碳源是玉米粉，最適氮源是豆粕，最適培養(yǎng)溫度是28℃，最適pH值范圍為7.0。對生防菌株HN4-0毒素的提取和初步鑒定，采用了高效液相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）方法分析，明確了HN4-0的除草活性物質(zhì)為鄰苯二甲酸二甲酯。通過對除草活性物質(zhì)對列當抑制性的測定及最適稀釋濃度的篩選，明確了生防菌HN4-0防治列當

6、的機制。
　　結論：篩選出高效生防菌株腐霉菌HN4-0，通過形態(tài)學特征觀察和18SrDNA分析鑒定其為瓜果腐霉Pythiumaphanidermatum。通過單因素篩選和發(fā)酵工藝優(yōu)化，得出最適碳源（玉米粉）為35.31g/100mL，pH值為7.91，培養(yǎng)溫度為28.11℃時，最大的發(fā)酵產(chǎn)量預測值達到1.377g/100mL。通過高效液相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜法分析生防菌HN4-0乙酸乙酯相提取液的除草活性物質(zhì)為鄰苯二甲酸二甲酯。