馬鈴薯晚疫病菌的長期保存與特異性SCAR標記的開發(fā).pdf

1、馬鈴薯是世界上繼水稻、小麥和玉米之后的第四大糧食作物。2008年被聯(lián)合國宣布為“國際馬鈴薯年”(IYP)更突顯出馬鈴薯在全球糧食系統(tǒng)中的重要地位，我國馬鈴薯的種植面積與產量均居世界首位，但是由卵菌門致病疫霉[Phytophthora infestans(Mont.)de Bary]引起的馬鈴薯晚疫病一直威脅著我國馬鈴薯產業(yè)的發(fā)展。
　　 由于馬鈴薯晚疫病菌的腐生能力弱，在干燥、過高或過低的溫度條件下很容易死去，所以很難利用其他病

2、原真菌的長期保存法來保存晚疫病菌。本研究利用礦物油對2006～2008年采自吉林省和黑龍江省的73株馬鈴薯晚疫病菌進行保存，測定了在不同保存時期的馬鈴薯晚疫病菌的生存力。結果表明在礦物油中保存的所有馬鈴薯晚疫病菌中，94.6％的菌株生存。實際上，在礦物油中保存4、5、6、10、12、13和15個月后菌株的生存率是100%；保存7個月后菌株的生存率是80%；保存8個月后菌株的生存率是90.5%；保存9個月后菌株的生存率是91.7%；保存1

3、1個月后菌株的生存率是88.9%；保存14個月后菌株的生存率是75%。本試驗采用離體接種的方法測定了不同保存時期馬鈴薯晚疫病菌的致病性，計算了礦物油保存后生存菌株的復合寄生適合度。結果表明，平均病斑面積是8.68 cm2，平均侵染率是1.0，平均產孢能力是5031個孢子囊/cm2，平均復合寄生適合度是40926。在礦物油中保存的馬鈴薯晚疫病菌的致病性分布在14806～414474個孢子囊/cm2。因此，礦物油保存方法能夠適用于馬鈴薯晚疫

4、病菌的長期保存。
　　 潛伏于馬鈴薯薯塊中的晚疫病菌是來年晚疫病發(fā)生的最主要初侵染源，馬鈴薯晚疫病在植株上發(fā)病初期很難鑒定，本研究根據已報道的晚疫病菌基因序列設計了一對特異性引物LB-3F/LB-3R，并利用此引物擴增從晚疫病菌和其他常見致病菌(大豆疫霉菌、馬鈴薯早疫病菌、腐霉菌、鐮刀菌、灰霉菌、立枯絲核菌)中提取的基因組DNA。擴增結果顯示在所擴增的馬鈴薯晚疫病菌中發(fā)現了大約150 bp特異性DNA片段，而其他菌株均未擴增出目

5、的條帶。將此特異性片段克隆、測序并與已公布的P.infestans A1交配型菌株的特異片斷(573 bp)進行比對。結果顯示本試驗插入的馬鈴薯晚疫病菌特異性片段大小為156 bp，測定基因序列與P.infestans A1交配型菌株的特異片斷(573 bp)的中間段基因序列(259 bp～414 bp)之間有99%的相似性。本試驗利用從特異性片段中收回基因組DNA合成探針，并利用此探針對馬鈴薯晚疫病菌及其他致病菌基因組DNA進行Sou

6、thern雜交驗證，結果只有晚疫病菌雜交出片段，其他菌株均無，這與PCR擴增結果一致。
　　 為了鑒定不同潛伏期馬鈴薯晚疫病的存在，本試驗利用該特異性引物分別擴增從不同接種時期(0、4、8、12、24、48、72、96、120 h)馬鈴薯葉片、莖、薯塊上提取的基因組DNA。結果顯示，在葉片上接種4h之后提取的基因組DNA中擴增出目的條帶，在莖上接種48 h之后基因組DNA中擴增出了目的條帶，在薯塊上接種24 h之后提取的基因組D