綿羊肺腺瘤病毒的分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè).pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、本研究設(shè)計(jì)了巢式RT-PCR、半巢式RT-PCR、斑點(diǎn)雜交三個(gè)試驗(yàn)，來(lái)準(zhǔn)確、敏感的檢測(cè)綿羊肺腺瘤病毒（Jaagsiekte sheep retrovirus JSRV）。通過(guò)在外源性綿羊肺腺瘤病毒的囊膜基因env的TM區(qū)和長(zhǎng)末端重復(fù)序列LTR的U3區(qū)分別設(shè)計(jì)特異性的巢式、半巢式引物以及特異性的探針，運(yùn)用巢式、半巢式RT-PCR、斑點(diǎn)雜交的方法進(jìn)行檢測(cè)、比較，同時(shí)也與普通RT-PCR進(jìn)行比較。結(jié)果表明，巢式RT-PCR測(cè)得的綿羊肺腺瘤病毒

2、的env基因和U3區(qū)序列與GenBank中發(fā)表的外源性綿羊肺腺瘤病毒基因序列的同源性分別為96％和98%，半巢式RT-PCR的同源性為96.8%和98%。特異性試驗(yàn)結(jié)果表明本研究設(shè)計(jì)的env基因和LTR的U3區(qū)的巢式、半巢式引物不能從健康綿羊、小鼠、家兔的肺組織以及感染了綿羊肺腺瘤病病羊的腎、肝、脾的RNA中擴(kuò)增出條帶。斑點(diǎn)雜交同樣也不能從健康綿羊和小鼠的肺組織得到陽(yáng)性的藍(lán)色斑點(diǎn)。敏感性試驗(yàn)結(jié)果表明，env基因和LTR的U3區(qū)的巢式、半

3、巢式RT-PCR診斷方法最低能檢測(cè)出的標(biāo)準(zhǔn)模板RNA量分別為48fg和48pg以及0.48pg和480ng，而普通的RT-PCR，env基因及LTR的U3區(qū)的最低檢出量分別為0.48ng和4.8ng，得出巢式RT-PCR的敏感性高于普通RT-PCR，而半巢式RT-PCR的env基因敏感性高于普通RT-PCR的env基因，但是LTR的U3區(qū)敏感性卻低于普通的RT-PCR，同時(shí)巢式RT-PCR的敏感性高于半巢式RT-PCR。斑點(diǎn)雜交env基

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