大豆球蛋白和β—伴球蛋白對(duì)小鼠腸上皮細(xì)胞營養(yǎng)生理功能的影響與分子機(jī)理研究.pdf

1、本研究以自備分離純化大豆抗原蛋白作實(shí)驗(yàn)材料，采用小鼠腸上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)技術(shù)，實(shí)驗(yàn)研究了純化大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白對(duì)小鼠腸上皮細(xì)胞生理功能及生化參數(shù)的影響，并在細(xì)胞分子水平探索了抗原蛋白對(duì)吸收（轉(zhuǎn)運(yùn)）相關(guān)基因表達(dá)的影響。
　　 1.大豆球蛋白和β-伴球蛋白分離制備。根據(jù)大豆7S和11S球蛋白在pH6.1-6.6之間溶解度不同的特點(diǎn)，先對(duì)脫脂大豆中兩種球蛋白進(jìn)行初步分離，然后利用硫酸銨進(jìn)行鹽析和凝膠過濾，除去非抗原蛋白組分，得

2、到純度相對(duì)較高的大豆球蛋白和β-伴球蛋白。實(shí)驗(yàn)制備結(jié)果表明：
　　 脫脂大豆（豆粕）在0.03mMTris-HC1、料液比1：20、PH8.0的室溫條件下提取2h，豆粕總蛋白提取率為32.88％，能得到蛋白質(zhì)含量為71.5％的11S粗組分和蛋白質(zhì)含量60.7％的7S粗組分。粗提取產(chǎn)物經(jīng)鹽析和凝膠過濾，可得到蛋白含量84.2％的純化大豆球蛋白，和蛋白含量79.5％的純化β-伴球蛋白。
　　 2.自備大豆球蛋白和β-伴球蛋白

3、的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，設(shè)計(jì)三個(gè)實(shí)驗(yàn)研究了不同水平純化大豆球蛋白、β-伴球蛋白(0、1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml)對(duì)體外培養(yǎng)原代小鼠腸上皮細(xì)胞完整性、細(xì)胞生物學(xué)功能及對(duì)基因表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：
　　 大豆球蛋白、β-伴球蛋白顯著降低體外培養(yǎng)的小鼠腸上皮細(xì)胞數(shù)量，極顯著影響細(xì)胞MTTOD值(P＜0.01)。細(xì)胞培養(yǎng)過程提高大豆球蛋白、β-伴球蛋白含量，顯著增加培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶

4、、堿性磷酸酶、細(xì)胞Na+-K+-ATP酶活性及一氧化氮、IL-2、IL-6、IL-8含量(P＜0.05)，顯著降低細(xì)胞蛋白含量、蛋白沉積量、細(xì)胞谷草轉(zhuǎn)氨酶活性(P＜0.05)。大豆球蛋白、β-伴球蛋白不影響培養(yǎng)液中NH3含量(P＞0.05)。
　　 細(xì)胞分子水平的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，β-伴球蛋白、大豆球蛋白均降低PEPT1和DMT1基因的表達(dá)量。β-伴球蛋白顯著降低PEPT1基因表達(dá)(P＜o(jì).05)，高劑量β-伴球蛋白的影響更顯著。β

5、-伴球蛋白對(duì)DMT1的基因表達(dá)的影響明顯大于大豆球蛋白的影響。
　　 本論文實(shí)驗(yàn)研究表明，豆粕抗原蛋白顯著影響細(xì)胞營養(yǎng)生理功能。β-伴球蛋白的作用明顯大于大豆球蛋白。β-伴球蛋白抑制消化道上皮細(xì)胞與主要營養(yǎng)物質(zhì)（蛋白質(zhì)）吸收相關(guān)基因(PEPT1)表達(dá)的作用強(qiáng)于抑制無機(jī)離子轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因(DMT1)表達(dá)的作用。大豆抗原蛋白造成的細(xì)胞分子水平的實(shí)質(zhì)變化是引起腸上皮細(xì)胞生理功能完整性變化、細(xì)胞生理生化參數(shù)顯著變化、造成細(xì)胞增殖能力降低，