農(nóng)桿菌介導HAK和PSY基因的玉米遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、鉀是植物正常生長所必需的大量礦質(zhì)元素，植物對鉀離子轉(zhuǎn)運能力關系著其對各種非生物脅迫的適應能力。本研究用農(nóng)桿菌介導法將高親和性鉀離子轉(zhuǎn)運體基因（HAK）轉(zhuǎn)入5個優(yōu)良玉米自交系7922、P138、265、238和271中，并對影響其遺傳轉(zhuǎn)化效率因素進行了優(yōu)化。當農(nóng)桿菌菌液濃度OD600為0.6，侵染時間15min，22℃條件下共培養(yǎng)3天時轉(zhuǎn)化率最高。經(jīng)PCR和RT-PCR檢測證實獲得陽性轉(zhuǎn)基因植株后代。除草劑涂抹實驗證明Bar基因已經(jīng)整合進

2、玉米基因組。用不同濃度的鹽溶液處理轉(zhuǎn)基因植株和對照植株，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植株葉片中的K+含量、脯氨酸和葉綠素含量均高于未轉(zhuǎn)化植株，而Na+含量低于未轉(zhuǎn)化植株，表明HAK基因已經(jīng)整合進玉米基因組，并通過過量表達提高了植株的耐鹽性。
　　類胡蘿卜素作為維生素A的前體，是人體內(nèi)不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)。類胡蘿卜素攝入量不足將直接導致人體維生素A的缺乏。玉米是世界上種植面積最為廣泛的作物之一，應用遺傳工程技術來提高玉米的類胡蘿卜素含量具有重要意義。本

3、研究以玉米自交系H00-108、7922的莖尖為受體，用農(nóng)桿菌介導法將八氫番茄紅素合成酶基因（PSY）轉(zhuǎn)入玉米中。以植株的轉(zhuǎn)化率為指標，研究了真空處理方式，真空處理時間及共培養(yǎng)時間對轉(zhuǎn)化率的影響。結果表明，當在真空條件下侵染20min，共培養(yǎng)三天時轉(zhuǎn)化率最高。用200mg/L的草胺膦溶液篩選，獲得的抗性植株經(jīng)過分子檢測有6株表現(xiàn)陽性。RT-PCR及高效液相色譜（HPLC）檢測結果表明PSY基因已經(jīng)整合進玉米基因組并能正常轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)基因玉米