以GBSS、SSⅢ、SSⅡ基因?yàn)榘袠?biāo)的RNAi載體對(duì)馬鈴薯的轉(zhuǎn)化及鑒定.pdf

1、馬鈴薯（Solanum tuberosum L．）淀粉在食品和化工領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用價(jià)值，而淀粉的糊化特性和凝沉性成為其應(yīng)用的重要參考指標(biāo)。目前，生產(chǎn)上推廣的馬鈴薯品種，其淀粉糊化溫度和凍融穩(wěn)定性都不理想。隨著淀粉生物合成途徑中各種相關(guān)酶代謝途徑及機(jī)理的深入研究，利用基因工程技術(shù)調(diào)控作物淀粉合成過(guò)程中相關(guān)酶基因的表達(dá)，從而使降低淀粉糊化溫度和提高凍融穩(wěn)定性成為可能。為此，本研究利用RNA干擾技術(shù)，通過(guò)調(diào)控馬鈴薯塊莖中淀粉合成關(guān)鍵酶基因的

2、表達(dá)，從而改變馬鈴薯中淀粉的分子組成，并獲得具有淀粉糊化溫度低且凍融穩(wěn)定性好的加工型馬鈴薯品種。目前取得的結(jié)果有： （1）分別將GBSS基因啟動(dòng)子和Patatin組織特異性啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的GBSS、SSⅡ和SSⅢ基因部分片段融合的植物表達(dá)載體pART-GF、pART-PF導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌LBA4404，得到了含有靶標(biāo)基因RNAi載體的農(nóng)桿菌工程菌。 （2）選用馬鈴薯“L3”、“WS1”、“XD”和“Z”的莖段和葉片作為外植體材

3、料，在MS培養(yǎng)基基本成分的基礎(chǔ)上，對(duì)生長(zhǎng)激素（NAA，6-BA和GA3）的濃度和配比進(jìn)行了優(yōu)化，初步建立了優(yōu)化的馬鈴薯遺傳轉(zhuǎn)化體系。 （3）用攜帶植物表達(dá)載體的農(nóng)桿菌對(duì)“L3”、“WSI”、“XD”和“Z”四個(gè)優(yōu)良馬鈴薯品種進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化，通過(guò)抗性篩選初步獲得了抗性植株。 （4）通過(guò)半定量RT-PCR分析，對(duì)轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植株中的內(nèi)源GBSS基因的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行了分析，結(jié)果GBSS基因的轉(zhuǎn)錄物只有非轉(zhuǎn)基因植株中的1/3。淀粉