水稻紋枯病菌原生質(zhì)體制備及再生菌株的生物學(xué)特性研究.pdf

1、水稻紋枯病是水稻上的三大病害之一，嚴(yán)重的影響了水稻的產(chǎn)量和質(zhì)量。引起水稻紋枯病害的病原菌包括多核的瓜亡革菌（Thanatephorus cucumeris）和雙核的稻角擔(dān)菌（Ceratobasidium oryzae-sativae），它們的無(wú)性世代分別稱(chēng)為茄絲核菌（Rhizoctonia solani Kühm）和稻絲核菌（Rhizoctonia oryzae-sativae）。病菌難以產(chǎn)生擔(dān)孢子、不產(chǎn)生無(wú)性孢子以及缺乏高效的遺傳轉(zhuǎn)化

2、系統(tǒng)等因素導(dǎo)致水稻紋枯病菌的分子生物學(xué)特性研究相對(duì)滯后，甚至難以開(kāi)展。本論文以瓜亡革菌菌株WH-1，稻角擔(dān)菌菌株WH-87及含有稻角擔(dān)菌和瓜亡革菌兩種真菌rDNA的菌株RCOL-1為試驗(yàn)材料，進(jìn)行了原生質(zhì)體的制備、再生以及原生質(zhì)體再生后代生物學(xué)特性分析，旨在探索水稻紋枯病菌原生質(zhì)體制備和再生規(guī)律，為建立水稻紋枯病菌遺傳轉(zhuǎn)化體系提供轉(zhuǎn)化材料。
　　 對(duì)影響水原生質(zhì)體制備的酶、酶濃度、酶解時(shí)間、菌齡及培養(yǎng)條件等因素進(jìn)行了研究，試驗(yàn)結(jié)

3、果如下：供試菌株WH-1原生質(zhì)體制備的最佳條件是裂解酶（Lysing Enzymes，Sigma）濃度1.5％，菌齡是將菌絲于28℃條件下，120 rpm，PDB中搖培15 h，裂解酶反應(yīng)時(shí)間是150 min，純凈的原生質(zhì)體稀釋后涂布在RM上于28℃條件培養(yǎng)，再生率為65％。供試菌株WH-87和RCOL原生質(zhì)體制備的最佳條件是：裂解酶濃度為2％，菌齡是將菌絲于28℃條件下，120 rpm，PDB中搖培24 h，酶解時(shí)間是150 min，

4、純凈的原生質(zhì)體稀釋后涂布在RaM上于28℃條件培養(yǎng)，再生率為32.6％和2％。
　　 以菌株WH-1為出發(fā)菌株，獲得了40株原生質(zhì)體再生菌株。與出發(fā)菌株的菌落形態(tài)相比，這些再生菌株在菌落形態(tài)和核型上沒(méi)有顯著差異；有27個(gè)再生菌株的生長(zhǎng)速度與出發(fā)菌株相比顯著增快；原生質(zhì)體再生菌株在致病力上也存在顯著性差異。
　　 以菌株WH-87為出發(fā)菌株，獲得了140個(gè)原生質(zhì)體再生菌株。根據(jù)再生菌株的菌落形態(tài)差異，將這些再生菌株分為兩種

5、類(lèi)型（類(lèi)型Ⅰ和類(lèi)型Ⅱ），類(lèi)型Ⅰ與菌株WH-87類(lèi)似。對(duì)50個(gè)再生菌株進(jìn)行生長(zhǎng)速度測(cè)定，結(jié)果表明：Ⅰ類(lèi)菌株生長(zhǎng)速度高于出發(fā)菌株，Ⅱ類(lèi)菌株生長(zhǎng)速度顯著低于出發(fā)菌株，分別占全部原生質(zhì)體再生菌株的88.6％和11.4％。它們的致病力存在顯著性差異。細(xì)胞核型沒(méi)有差異。
　　 以菌株RCOL為出發(fā)菌株，獲得的82個(gè)原生質(zhì)體再生菌株。根據(jù)再生菌株的菌落形態(tài)差異，將這些再生菌株分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ種類(lèi)型，分別占全部原生質(zhì)體再生菌株的61.1％、13％