花鱸Syntaxin4基因的克隆及表達特征.pdf

1、SNAREs是真核細胞的膜蛋白，參與分泌囊泡的胞內運轉和囊泡與靶膜的融合過程，在細胞內膜系統(tǒng)的囊泡膜和靶膜上均有分布。SNAREs蛋白家族的主要成員包括Syntaxin，SNAP-25和VAMP，三者相互作用時可形成7S復合體，介導囊泡膜與質膜的融合，行使其功能。 Syntaxin4是SNARE家族成員之一，在吞噬和分泌中起重要作用。實驗中通過比較GenBank中不同Syntaxin4基因的同源相似性，設計出特異性引物，利用R

2、T-PCR方法克隆出該基因部分序列，再利用5'RACE和3'RACE技術克隆出花鱸Syntaxin4全長序列。該基因全長2444bp，其中開放閱讀框為897bp，編碼298個氨基酸。使用不同的生物學軟件和服務器對Syntaxin4基因進行同源性分析、二級結構預測、跨膜結構預測以及疏水性分析，確定Syntaxin4的功能作用位點。 利用實時定量PCR技術，分析Syntaxin4基因在mRNA水平上的相對表達量。結果表明，該基因在腦

3、組織和免疫相關組織中都有表達，以腦組織的表達量最多，在免疫相關組織中的表達量多少依次是脾臟、頭腎和血液。在LPS刺激24h后，脾臟和頭腎中的表達量分別是對照組的7．83倍和10．41倍，表明免疫組織中Syntaxin4的相對表達量隨誘導增強，重要細胞免疫因子TNFα和IL-1β在刺激后表達量的增加與Syntaxin4的變化趨勢是一致的。 使用免疫熒光組織化學方法，初步證實了Syntaxin4存在于花鱸巨噬細胞細胞膜上。通過免疫印