不同柑桔品種對(duì)柑桔衰退病病毒分離株構(gòu)成的影響.pdf

1、柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus，CTV)引起的柑桔衰退病，嚴(yán)重威脅著世界柑桔的發(fā)展。該病害主要通過(guò)蚜蟲(chóng)和嫁接傳播，而我國(guó)CTV及其強(qiáng)力傳媒褐色橘蚜(Toxoptera citricida Kirkaldy)廣泛分布。目前我國(guó)柑桔的栽培面積和產(chǎn)量分別居世界第一位和第二位，隨著柚類(lèi)、甜橙類(lèi)和雜柑類(lèi)的種植比例日趨增大，莖陷點(diǎn)型衰退病在柚類(lèi)、敏感的甜橙和雜柑類(lèi)的危害日益嚴(yán)重，已經(jīng)成為生產(chǎn)上突出問(wèn)題。依據(jù)國(guó)外經(jīng)驗(yàn)，在CT

2、V強(qiáng)毒株和褐色桔蚜共存的地區(qū)，弱毒株交叉保護(hù)技術(shù)(MSCP)是防治柑桔莖陷點(diǎn)型衰退病最有效的措施。由于MSCP往往具有品種和地域?qū)；?，了解不同品種對(duì)CTV分離株和不同來(lái)源的毒源株系的分布和互作規(guī)律，為弱毒株交叉保護(hù)的應(yīng)用提供有力的參考依據(jù)。 本研究應(yīng)用直接組織點(diǎn)免疫(DTBIA)對(duì)田間植株和原原種保存圃植株進(jìn)行初篩，選用五大類(lèi)13個(gè)陰性樣品植株作為寄主，將不同來(lái)源的CTV強(qiáng)毒分離株CT14(1組群)、C13&(1+3+6組群)

3、和CTl7(1+3組群)接種在上面。DTBIA檢測(cè)后的陽(yáng)性樣品，應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄—多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT—PCR)擴(kuò)增CTV分離株的衣殼蛋白基因(CPG)，結(jié)合限制性?xún)?nèi)切酶HinfⅠ對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行限制性片段多態(tài)性(RFLP)和單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(SSCP)，同時(shí)對(duì)部分亞分離株進(jìn)行p25基因序列測(cè)定。主要研究結(jié)論有： 1．RFLP分析：對(duì)DTBIA檢測(cè)為陽(yáng)性的亞分離株進(jìn)行了RFLP分析，其中單一組群的毒源分離株(CT14，第1組群)嫁接

4、到不同柑桔品種以后，RFLP組群未發(fā)生改變；混合組群CT36(1+3+6組群)嫁接到不同柑桔品種以后，RFLP組群發(fā)生了一定的改變，在柚類(lèi)寄主上p25/HinfⅠ RFLP為第1組群、第6組群和3+6混組群三種形式，雜柑上p25/HinfⅠ RFLP為第6組群和3+6混組群兩種組群形式，寬皮柑桔和甜橙是3+6混組群?；旖M群CT17(3+6組群)接種至不同寄主品種后，在柚類(lèi)品種CTV亞分離株的p25/HinfⅠ RFLP為第3組群和1+3

5、混組群，在雜柑上為第1組群和1+3混組群，甜橙上為第1組群、第3組群和1+3混組群三種形式，在寬皮柑桔上為第1組群、第3組群和1+3混組群三種形式。 2．SSCP分析：CT17、CT36混組群接種在不同寄主品種上SSCP圖譜差異明顯，分別出現(xiàn)2、4、6和8條譜帶，表現(xiàn)多態(tài)性。 3．P25基因序列分析：對(duì)接種毒源CT17變異后的單組群亞分離株進(jìn)行序列分析比對(duì)，不同CTV株系來(lái)源的相同變異組群亞分離株4-1、4-4、4-19

6、、4-24、4-25和4-30在CPGs同源性為100％，4-12、4-34、4-38和4-42四個(gè)亞分離株的同源性為100％。第3組群的4-12與第1組群的3個(gè)亞分離株同為一簇，在進(jìn)化樹(shù)上有細(xì)微差異，再次驗(yàn)證隱藏的株系不一定消失；第1組群和第3組群的亞分離株同為一分枝上兩簇，同源性較近。 4．生物學(xué)特性分析：不同品種接種CTV后的亞分離株表明，鳳凰柚、沙田柚對(duì)莖陷點(diǎn)型衰退病敏感，一年生苗木上可表現(xiàn)癥狀；蜜奈夏橙、琯溪蜜柚、強(qiáng)德