新西蘭兔卵母細胞體外成熟、體外受精及受精卵體外培養(yǎng)的研究.pdf

1、本實驗以44只新西蘭母兔為實驗素材，主要研究兔卵巢表面卵母細胞體外成熟、體外受精以及受精卵的不同體外培養(yǎng)條件，以優(yōu)化兔卵母細胞體外成熟、體外受精以及受精卵培養(yǎng)的體系，實驗結(jié)果如下：
　　 1.采用切割法、針刺擠壓法收集卵巢表面卵母細胞，檢驗不同采集方法對收集卵巢卵母細胞數(shù)量的影響。結(jié)果表明：針刺擠壓法的所獲得的卵母細胞數(shù)(23.63/只)顯著高于切割法(16.50/只)(p＜0.05)。
　　 2.比較添加不同濃度的FS

2、H、LH對兔卵母細胞體外成熟的影響，結(jié)果表明：1 U/mL FSH+2 U/mL LH的成熟率最高，達到46.62％，極顯著高于對照組(TCM199+10％FCS)的成熟率(13.71％，p＜0.01)，顯著高于高濃度組(10 U/mLFSH+20 U/mL LH)的成熟率(26.83％，p＜0.05)。
　　 3.比較了不同的成熟培養(yǎng)時間對卵母細胞成熟率的影響，以成熟培養(yǎng)液培養(yǎng)卵母細胞，分別在成熟培養(yǎng)24 h、30 h、36

3、h、40 h對部分卵母細胞用透明質(zhì)酸酶處理后觀察第一極體排出率，其余部分加精子觀察受精率。培養(yǎng)24 h、30 h、36 h、40 h的成熟率分別為21.92％、46.62％、52.77％、30.71％，這就表明：成熟時間為30、36 h的成熟率顯著高于成熟時間為24、40 h的成熟率(p＜0.05)。
　　 4.以TCM199+FCS+FSH+LH+E2+丙酮酸鈉為基礎(chǔ)成熟培養(yǎng)液，分別添加50 ng/mL及100 ng/mL的E

4、GF、10 ng/mL及20 ng/mL的SCF、10 ng/mL及20 ng/mL的LIF，然后比較了EGF、SCF及LIF對卵母細胞成熟率的影響。結(jié)果表明：50 ng/mL及100 ng/mL的EGF能顯著地提高了卵母細胞成熟率(基礎(chǔ)成熟培養(yǎng)液、添加50ng/mL及100 ng/mL的EGF組的成熟率分別為49.04％、61.39％和65.79％)。SCF對卵母細胞成熟率無明顯影響(成熟率分別為54.17％、50.00％和45.83

5、％)，而LIF對卵母細胞成熟有明顯的抑制作用(成熟率分別為54.19％、12.50％和4.17％)。
　　 5.比較了上游法、直接洗滌法和Percoll密度梯度離心法三種精子處理方法對兔精子回收率及卵裂率的影響，三種方法的回收率分別為7.8％、93.9％、86.9％，受精后的卵裂率分別為0％、39.05％、54.29％，結(jié)果表明：Percoll密度梯度離心法是一種較理想的精子處理方法。
　　 6.比較了常規(guī)體外受精與顯微

6、注射卵裂率，結(jié)果顯示，常規(guī)體外受精卵裂率(63.97％)極顯著高于顯微注射卵裂率(25.65％)(p＜0.01)。
　　 7.比較了TCM199+10％FCS和DMEM+10％FCS對胚胎(取自常規(guī)體外受精的2-細胞)發(fā)育的影響，結(jié)果表明兩者之間無顯著差異(p＞0.05)。
　　 8.以TCM199+10％FCS為基礎(chǔ)的受精卵培養(yǎng)液，分別添加一定濃度的維生素C(100μmol/L)及β-巰基乙醇(50μmol/L)，然后