無(wú)乳鏈球菌微球疫苗制備及其對(duì)羅非魚(yú)免疫效果的研究.pdf

1、本試驗(yàn)選用實(shí)驗(yàn)室分離保存的無(wú)乳鏈球菌高免疫原性菌株作為制備微球疫苗菌株，先用福爾馬林滅活制備成水劑疫苗，進(jìn)一步利用海藻酸鈉做為口服投遞載體，采用乳化復(fù)沉淀方法包裹無(wú)乳鏈球菌制備成微球口服疫苗。在制備的過(guò)程中對(duì)最佳菌液濃度進(jìn)行了篩選，并對(duì)微球疫苗效果進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明，制備微球疫苗的最佳菌濃度為3.0×109cfu/mL，制備的微球疫苗灌胃和投喂的免疫保護(hù)率可達(dá)70％和65％。
　　通過(guò)兩種方式免疫健康的吉富羅非魚(yú)，第一種免疫

2、方式為口服投喂，設(shè)4個(gè)試驗(yàn)組，分別標(biāo)記為微粒組(菌濃度3.0×109 cfu/mL)、菌體組(菌濃度3.0×109 cfu/mL)、空微粒組和對(duì)照組，免疫組分別用微球疫苗、菌體疫苗、空微球疫苗拌配合飼料連續(xù)免疫7d，間隔5d(投喂配合飼料)，加強(qiáng)免疫一周(投喂免疫飼料)；第二種免疫方式為浸泡+口服投喂，設(shè)4個(gè)試驗(yàn)組，分別標(biāo)記為浸泡+口服微粒組，浸泡+口服菌體組，浸泡組和對(duì)照組，免疫組試驗(yàn)魚(yú)先用水劑疫苗浸泡20min，用配合飼料喂養(yǎng)1個(gè)月

3、，再用按口服投喂方式加強(qiáng)免疫羅非魚(yú)。免疫后每周對(duì)試驗(yàn)魚(yú)進(jìn)行尾靜脈采血，連續(xù)采血8周，測(cè)定羅非魚(yú)血清中抗體效價(jià)水平、溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活力、過(guò)氧化氫酶活性；并測(cè)定56d后以相應(yīng)菌株攻毒后的相對(duì)保護(hù)率。
　　結(jié)果顯示：無(wú)乳鏈球菌疫苗對(duì)羅非魚(yú)具有較強(qiáng)的免疫原性。(1)免疫組羅非魚(yú)血清中的抗體效價(jià)水顯著性提高(P<0.05)，口服投喂方式和浸泡+口服投喂方式的抗體效價(jià)最高分別達(dá)到1:64和1:128；(2)從第一次采樣開(kāi)始，免疫組

4、羅非魚(yú)血清中的LSZ活力、SOD活力、CAT活力全部顯著高于同期對(duì)照組(P<0.05)；(3)口服投喂投喂免疫保護(hù)率：微粒組(68％)>菌體組(32％)>空微粒組(9％)；浸泡+口服投喂免疫保護(hù)率：浸泡+口服微粒組(73％)>浸泡+口服菌體組(60％)>浸泡組(46％)。
　　上述結(jié)果表明，有海藻酸鈉包被的疫苗免疫保護(hù)率高于沒(méi)有海藻酸鈉包被的疫苗，浸泡結(jié)合口服免疫能夠進(jìn)一步提高對(duì)吉富羅非魚(yú)的免疫保護(hù)性；本研究所制備的無(wú)乳鏈球菌微球