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文檔簡(jiǎn)介
1、柑桔全爪螨Panonychus citri(McGregor)是我國(guó)柑桔生產(chǎn)上最主要的害螨,世代歷期短,繁殖力強(qiáng)、防治上用藥頻繁。隨著螨類對(duì)化學(xué)藥劑抗藥性增強(qiáng),農(nóng)藥的使用數(shù)量逐年增加,引起了人們對(duì)應(yīng)用有毒化學(xué)品所導(dǎo)致的直接或間接潛在危險(xiǎn)和危害的重視。因此,符合環(huán)保、健康理念的高效、低毒、低殘留、與環(huán)境相容的農(nóng)藥成為當(dāng)今農(nóng)藥研究的主題。其中,從天然植物中尋找殺螨成分,進(jìn)行植物源農(nóng)藥的研究是最誘人也是最熱門的話題。 本文主要研究了牛
2、蒡等廣泛分布于我國(guó)各地區(qū)的15科30種中草藥植物的殺螨活性,對(duì)牛蒡殺螨活性物質(zhì)進(jìn)行分離、純化和鑒定,研究了部分殺螨作用機(jī)理,取得的主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下: 1.采用乙醇作為提取劑,超聲波萃取法對(duì)30種中草藥植物進(jìn)行提取,室內(nèi)生物測(cè)定方法評(píng)價(jià)其殺螨活性。結(jié)果表明,處理24h后,30種植物提取物(濃度為1g/ml)對(duì)柑桔全爪螨雌成螨、卵的觸殺活性表明,大多數(shù)供試植物表現(xiàn)出較好的雌成螨觸殺活性,沒(méi)有發(fā)現(xiàn)對(duì)害蟲有負(fù)殺蟲效應(yīng)的植物提取物。黃連、
3、草烏、牛蒡、小茴香的校正死亡率大于90%,活性較高;白術(shù)、苦參、藁本、前胡、厚樸、羌活、川芎、五加皮、孔雀草、側(cè)柏的校正死亡率為60%~90%,活性中等;其余植物提取物均活性較差??鄥ⅰ⑥槐?、草烏、茴香提取物表現(xiàn)出較好的殺雌成螨活性,LC50在0.0658g/L~0.1385 g/L之間,但殺卵的校正死亡率僅為3.775%~48.16%,LC50在144.1805 g/L~1628.90 g/L之間。牛蒡提取物對(duì)雌成螨、卵的觸殺毒力的L
4、C50值分別為0.0750 g/L和3.8562 g/L、產(chǎn)卵抑制率為75%,殺螨活性最佳。 2.通過(guò)不同極性溶劑萃取法、柱色譜法和薄層層析分離技術(shù)對(duì)牛蒡乙醇提取物進(jìn)行了活性成分分離,測(cè)定了不同分離組分對(duì)柑桔全爪螨的觸殺活性。牛蒡乙醇提取物以氯仿作為溶劑的萃取率最高(1.85%),石油醚其次(0.63%),乙酸乙酯最低(0.23%)。3種萃取物經(jīng)葉片浸漬法進(jìn)行活性測(cè)定,石油醚部分觸殺殺螨活性最強(qiáng),LC50值為0.0801 g/L
5、,氯仿部分的LC50值為1.8740 g/L,表明牛蒡有效成分主要存中于極性偏弱的石油醚、氯仿萃取部分。合并石油醚、氯仿組分,經(jīng)大柱初分,中柱細(xì)分,最后分離出四個(gè)流分,經(jīng)葉片浸漬法生物活性測(cè)定,流分L1-2對(duì)柑桔全爪螨的觸殺毒力高達(dá)0.0025 g/L。經(jīng)紫外吸收和顏色反應(yīng)法鑒定,推測(cè)流分L1-2中含有共軛雙鍵或三鍵。氣相質(zhì)譜—質(zhì)譜聯(lián)用鑒定結(jié)果顯示,牛蒡萃取物L(fēng)1-2組分中主要包括十六碳烷酸甲酯、十八碳烷酸甲酯、三十碳烷酸甲酯、三十一碳
6、烷酸甲酯、十八碳二烯酸甲酯等9種主要成分,總含量達(dá)到85.32%:還有少量醛類、烯醇、烯烴類物質(zhì)。 3.L1-2組分(濃度為4.668μg/μl)處理后,柑桔全爪螨活動(dòng)分為以下幾個(gè)階段:靜止期(0~5h):螨明顯靜止,無(wú)明顯反應(yīng);興奮期(5~7h):運(yùn)動(dòng)不停,步態(tài)失調(diào),站立不穩(wěn);螨體開始出現(xiàn)膨脹,大部分從暗紅色變?yōu)轷r紅色;痙攣期(7~14h):過(guò)度興奮,蟲身翻倒,八足交錯(cuò)擺動(dòng);螨體向一側(cè)傾斜,足痙攣;停止顫抖,全足抽搐;少數(shù)擴(kuò)散
7、逃逸;排泄物極少,呈黑色;產(chǎn)卵量急劇下降;螨體顏色鮮亮;麻痹期(14~18h):螨體靜止不動(dòng),身體開始萎縮;死亡期(18~24h):身體逐漸收縮至死亡。 4.研究了活性組分對(duì)CarE、AChE、GSTs三種螨類常見(jiàn)酶類的影響。結(jié)果表明:離體試驗(yàn)中,L1-2組分對(duì)柑桔全爪螨CarE、AChE、GSTs的比活力隨著濃度的增加呈降低趨勢(shì),這表明L1-2組分對(duì)CarE、AChE、GSTs有顯著的抑制作用,且處理間差異顯著?;铙w試驗(yàn)中,L
8、1-2組分對(duì)CarE有強(qiáng)烈的先激活再抑制的作用。12h前對(duì)CarE的作用效果表現(xiàn)為誘導(dǎo)作用,隨著濃度的提高比活力分別增加了44.72%、33.13%、27.3%、17.34%、10.08%。12h后,當(dāng)提取物濃度為0.2344μg/μl時(shí),對(duì)CarE的作用效果表現(xiàn)為抑制,且隨著濃度的增大抑制效果顯著提高。處理12 h后,L1-2組分對(duì)柑桔全爪螨AChE活力表現(xiàn)為誘導(dǎo)作用,隨著濃度的升高比活力分別增加了27.95%、32.76%、30.6
9、3%、10.18%、3.69%。24h后,當(dāng)L1-2組分濃度為0.4688×10-3μg/μl時(shí),柑桔全爪螨AChE開始受到抑制,且隨著濃度的升高抑制作用逐漸增強(qiáng)。當(dāng)濃度為4688μg/μl時(shí)抑制作用急劇增強(qiáng),達(dá)到64.07%。處理12h后,L1-2組分對(duì)柑桔全爪螨GSTs表現(xiàn)為抑制作用,隨著濃度的提高而迅速上升。24 h后,當(dāng)L1-2組分濃度為0.2344×10-1時(shí),對(duì)柑桔全爪螨GSTs抑制作用高達(dá)到38.94%?;铙w實(shí)驗(yàn)初期,活性
10、成分對(duì)三種常見(jiàn)酶系的敏感性并不一致,對(duì)GSTs迅速表現(xiàn)為抑制作用。隨著濃度的提高和時(shí)間的延長(zhǎng),對(duì)AChE、CarE抑制作用出現(xiàn)并迅速上升。表明L1-2組分對(duì)柑桔全爪螨三種常見(jiàn)酶系的作用與時(shí)間和濃度關(guān)系密切,隨著時(shí)間的延長(zhǎng)和濃度的增大,抑制作用逐漸增強(qiáng)。 牛蒡?yàn)槌S媒獗眍愔胁菟?,植物資源豐富,其揮發(fā)油被認(rèn)為是良好的保健食用油,作為植物源農(nóng)藥的來(lái)源相對(duì)安全。牛蒡含有的9,12-Octadecanoic acid methyl est
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