免疫熒光試劑盒臨床應(yīng)用

1、免疫熒光試劑盒在生殖道感染病原體檢測(cè)中的臨床應(yīng)用,深圳市邁科龍生物技術(shù)有限公司,免疫熒光技術(shù),免疫熒光標(biāo)記技術(shù)（immunofluorescence technique）是標(biāo)記免疫技術(shù)的一種，是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)。,經(jīng)過不斷改進(jìn)發(fā)展，免疫熒光技術(shù)已成為微生物學(xué)、免疫學(xué)、病理學(xué)及免疫組織化學(xué)中準(zhǔn)確又快速的一種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)方法。,1 免疫熒光原理 將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體（或抗原）上

2、，與樣本中的抗原（或抗體）結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。,基本反應(yīng)原理為抗原—抗體間的反應(yīng),,2 免疫熒光特點(diǎn),特異性強(qiáng)、敏感性高、檢測(cè)速度快（單個(gè)樣本處理時(shí)間約40分鐘，批量樣本報(bào)告時(shí)間以半天或隔天最佳）,直接免疫熒光法（DFA） 將標(biāo)記的特異熒光抗體直接加在抗原標(biāo)本上，經(jīng)一定溫度和時(shí)間的染色，在熒光顯微鏡下便可觀察到被檢抗原與熒光抗體形成的特異性結(jié)合物所發(fā)出的熒光。,直接免疫熒光示意圖,,免疫熒光技術(shù)的應(yīng)

3、用,免疫熒光技術(shù)應(yīng)用范圍極其廣泛，可以應(yīng)用于生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。,尤其適用病原微生物的快速鑒定檢測(cè)，具有形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)的雙重優(yōu)點(diǎn)。,臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)組織(CLIA)指出直接免疫熒光法最適合用于日常臨床和參考實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。,邁科龍免疫熒光法生殖道病原體檢測(cè)試劑盒,,造成非淋菌性尿道炎的重要病原體，其感染已超過淋球菌感染而位居性傳播疾病之首可致尿道炎、宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎及盆腔炎對(duì)懷孕可致早產(chǎn)、流產(chǎn)、胎膜早破、胚胎停育等嚴(yán)重妊娠并發(fā)癥產(chǎn)道

4、感染可致嬰兒急性結(jié)膜炎母嬰傳播可致新生兒眼炎或肺炎引起不孕不育,沙眼衣原體,1.臨床意義,潛伏期，平均為1～3周 男性患者臨床表現(xiàn)：尿痛，或尿頻、尿道刺癢和不適，陰體局部疼痛尿道分泌物常為漿液性或粘液膿性，較稀薄，量少 女性患者臨床表現(xiàn)：尿道有分泌物，呈漿液性或漿液膿性，尿痛，尿頻白帶增多，色黃或帶血性，或有異味非經(jīng)期或性交后出血宮頸品可見粘液膿性分泌物，宮頸充血、消腫，觸之易出血,2.臨床表現(xiàn),近年來(lái)國(guó)際上

5、已將免疫熒光法作為一項(xiàng)“擴(kuò)大的金標(biāo)準(zhǔn)”來(lái)鑒定沙眼衣原體培養(yǎng)和非培養(yǎng)結(jié)果相異的標(biāo)本，其敏感性為80%-90%，特異性則在95%以上。衛(wèi)生部頒布的《非淋菌性尿道炎診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》（WS238－2003）中，直接免疫熒光法為沙眼衣原體推薦檢測(cè)方法。,沙眼衣原體臨床檢驗(yàn)方法,沙眼衣原體陽(yáng)性圖片,治療方案,初發(fā)病例多西環(huán)素100mg，口服，2次/日，連服7～10天阿奇霉素1g，一次頓服，飯前1小時(shí)或飯后2小時(shí)服用紅霉素500mg，口

6、服，4次/日，連服7天琥乙紅霉素800mg，口服，4次/日，連服7天氧氟沙星300mg，口服，2次/日，連服7天米諾環(huán)素100mg，口服，2次/日，連服10天,復(fù)發(fā)性或持續(xù)性病例，尚無(wú)有效的治療方案，推薦方案為：甲硝唑2g單次口服，加紅霉素堿500mg，口服，4次/日，共7天琥乙紅霉素800mg，口服，4次/日，連服7天 孕婦禁用多西環(huán)素和氧氟沙星，推薦方案為：紅霉素500mg，口服，4次/日，共7天紅霉素250m

7、g，口服，4次/日，共14天琥乙紅霉素800mg，口服，4次/日，共7天阿奇霉素1g，一次頓服,造成細(xì)菌性陰道炎的主要病原體，在陰道分泌物中檢出陰道加德納菌可用于診斷細(xì)菌性陰道炎引起尿道炎和陰道炎導(dǎo)致早產(chǎn)、低體重兒、絨毛膜炎、羊膜炎、羊水感染、子宮內(nèi)膜炎、急性輸卵管炎、手術(shù)后感染和子宮頸癌等經(jīng)性接觸傳播，與男性非淋菌性尿道炎有一定關(guān)系影響精子質(zhì)量，是男性不育的重要原因之一妊娠期感染，可能導(dǎo)致自然流產(chǎn)、早產(chǎn)產(chǎn)前、孕早期上行

8、感染可致胚胎停止發(fā)育,陰道加德納菌,1.臨床意義,2.臨床表現(xiàn)：陰道分泌物呈灰白色，很粘稠，甚至象面糊狀，均勻一致，但不是膿性分泌物，量多少不定。分泌物中胺含量特別高，故呈魚腥味，性交時(shí)或活動(dòng)后往往因促進(jìn)胺釋放而使氣味加重，分泌物中加入10%氫氧化鉀后也可釋出胺味。,3.臨床檢驗(yàn)方法,陰道加德納菌陽(yáng)性圖片,治療方案,非孕期★推薦方案甲硝唑500 mg，口服，2次/d，共7d0.75%甲硝唑膏(5g) ，陰道上藥，2次/d，共5

9、d2%克林霉素膏(5g)，陰道上藥，1次/晚，共7d★替代方案克林霉素300mg，口服，2次/d, 共7d克林霉素栓300g, 陰道上藥，1次/晚，共3d,妊娠期甲硝唑500mg，口服，2次/d，共7d甲硝唑250mg，口服，3次/d，共7d氯潔霉素300mg，口服，2次/d，共7d哺乳期選擇局部用藥，盡量避免全身用藥,奈瑟氏淋球菌,造成淋病的病原微生物，引發(fā)以泌尿生殖道化膿性炎癥為主要臨床癥狀的性傳播疾病淋病是常見

10、的性傳播疾病之一，且發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，已構(gòu)成威脅公眾健康的重大疾病妊娠期感染淋病對(duì)母嬰危害極大，宮內(nèi)感染易致自然流產(chǎn)、早產(chǎn)及胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩分娩時(shí)母嬰垂直傳播，可致新生兒淋病性結(jié)膜炎，治療若不及時(shí)徹底，新生兒有致盲的危險(xiǎn)淋病孕婦產(chǎn)后易發(fā)生散播性淋病,1.臨床意義,2.臨床表現(xiàn):2.1 無(wú)合并癥淋病2.1.1男性淋菌性尿道炎尿道口紅腫、發(fā)癢、有稀薄或黏液膿性分泌物，尿痛、燒灼感，排出黏稠的深黃色膿液。2.1.2女性泌尿生殖系

11、統(tǒng)的淋病淋菌性尿道炎：尿頻、尿急、尿痛、尿血及燒灼感。尿道口充血發(fā)紅，有膿性分泌物；淋菌性宮頸炎：為女性淋病的主要表現(xiàn)，白帶增多、陰道口有黏液膿性分泌物排出，外陰瘙癢，陰道內(nèi)輕微疼痛和燒灼感，陰道口充血，水腫，子宮頸口充血，糜爛，有黏液膿性分泌物。女童淋病：可見陰道口、尿道口、會(huì)陰部紅腫，病變部位可出現(xiàn)糜爛、潰瘍和疼痛。陰道有膿性分泌物，排尿困難。,2.2 有合并癥淋病2.2.1 男性淋病合并癥淋菌性附睪炎、睪丸炎：陰囊或睪丸

12、有牽引痛，進(jìn)行性加重，且向腹股溝處擴(kuò)散，體溫可升高至4O℃。檢查可見附睪、睪丸腫大、壓痛，病情嚴(yán)重時(shí)可觸及腫大的精索及腹股溝淋巴結(jié)淋菌性前列腺炎：發(fā)熱、尿痛、尿頻、尿急，有排尿不盡感和會(huì)陰脹痛，前列腺肛檢有明顯壓痛和腫大其它合并癥 ：可并發(fā)尿道旁腺炎、尿道周圍膿腫、海綿體炎、淋菌性龜頭炎或龜頭包皮炎、尿道狹窄等,2.2.2 女性淋病合并癥淋菌性盆腔炎: 包括淋球菌性子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎、輸卵管卵巢膿腫、腹膜炎等，好發(fā)于育齡婦女。多

13、數(shù)病人有白帶增多，且為膿性或血性。雙下腹痛，伴有畏寒、發(fā)熱、頭痛、厭食、惡心、嘔吐等淋菌性前庭大腺炎：出現(xiàn)前庭大腺紅腫、疼痛，腺體開口處有膿性分泌物，大陰唇下1/2腫脹明顯，還可伴有全身癥狀和腹股溝淋巴結(jié)腫大。,3. 臨床檢驗(yàn)方法,衛(wèi)生部《淋病診斷標(biāo)準(zhǔn)》（WS268-2007）指出，免疫熒光法可用于奈瑟氏淋球菌培養(yǎng)樣本鑒定。,奈瑟氏淋球菌陽(yáng)性圖片,治療方案,★推薦方案頭孢曲松125mg，單次肌注頭孢克肟400mg，單次頓服環(huán)丙沙

14、星500mg，單次頓服氧氟沙星400mg， 單次頓服左氧氟沙星250mg，單次頓服,白色念珠菌,陰道正常菌群之一，在各種致病因素影響之下，念珠菌優(yōu)勢(shì)繁殖引起外陰陰道念珠菌病(VVC)VVC是僅次于細(xì)菌性陰道病的陰道感染性疾病，75%的育齡婦女一生至少有一次發(fā)病白色念珠菌是陰道感染念珠菌的主要病原體，占80%-90%孕期感染未治療或治療不徹底可能因產(chǎn)時(shí)陰道操作引起產(chǎn)道感染，導(dǎo)致子宮復(fù)舊不良或傷口感染等妊娠合并念珠菌性陰道病患者

15、的胎兒多數(shù)在通過產(chǎn)道后感染，新生兒心、肺、腦組織等均存在念珠菌病灶,1.臨床意義,包括女性陰道炎及龜頭包皮炎。陰道炎：陰道分泌物粘稠、色黃或奶酪樣斑片，在陰道壁上可見灰白色假膜樣斑片，有瘙癢或灼熱感。龜頭包皮炎：較少見，可見包皮及龜頭潮紅、干燥光滑，包皮內(nèi)側(cè)及冠狀溝可見覆有假膜的斑片。,2.臨床表現(xiàn)：,白色念珠菌臨床檢驗(yàn)方法,白色念珠菌陽(yáng)性圖片,治療方案,可選擇下列藥物放于陰道內(nèi)：咪康唑栓劑，每晚1粒(200mg)，連用7天；或每

16、晚1 粒(400mg)，連用3天克霉唑栓劑，每晚1 粒(150mg)，塞入陰道深部，連用7天，或每天早、晚各1粒(150mg)，連用3天；或1 粒(500mg)，單次用藥嬌妍凝膠消毒劑，每晚一次，連用10～14 天,也可選擇口服藥物：氟康唑150mg，頓服伊曲康唑每次200mg，1次/d，連用3～5天；或口服400mg，1天服用2次,單純皰疹病毒II型,生殖器潰瘍最常見的原因之一，引起生殖器皰疹侵犯生殖器皮膚、粘膜引起紅斑、水

17、痘、糜爛及潰瘍性損害生殖器感染與宮頸癌有關(guān)增高對(duì)人類免疫缺陷病毒（HIV）的易感性生殖器潰瘍促進(jìn)HIV異性間傳播生殖器感染具有反復(fù)發(fā)作性早期診斷和治療對(duì)促進(jìn)患者皮損愈合，降低其傳染性及危害性有重要意義,1.臨床意義,原發(fā)性生殖器皰疹外生殖器或肛門周圍有群簇或散在的小水皰，2~4天后破潰形成糜爛或潰瘍，自覺疼痛腹股溝淋巴結(jié)常腫大，有壓痛常伴有發(fā)熱、頭痛、乏力等全身癥狀 復(fù)發(fā)性生殖器皰疹起疹前局部有燒灼感，針刺感或感覺異

18、常外生殖器或肛門周圍群簇小水皰，很快破潰形成糜爛或淺潰瘍，自覺癥狀較輕。,2.臨床表現(xiàn),3. 臨床檢驗(yàn)方法,單純皰疹病毒II型陽(yáng)性圖片,治療方案,生殖器皰疹首次發(fā)作★推薦方案無(wú)環(huán)鳥苷400mg，3次/d，口服，7~10d無(wú)環(huán)鳥苷200mg，5次/d，口服， 7~10d泛昔洛韋250mg，3次/d，口服，7~10d伐昔洛韋1g，2次/d，口服，7~10d 如果未完全治愈, 治療療程可超過10 d,間歇治療：即發(fā)作時(shí)給予

19、抗病毒藥物，推薦在出現(xiàn)前驅(qū)癥狀或皮損出現(xiàn)24h內(nèi)開始用藥，可選擇的方案包括：口服阿昔洛韋200mg每日5 次，共5 天阿昔洛韋400mg 每日3 次，共5 天伐昔洛韋500mg每日2 次，共5 天伐昔洛韋300mg每日2 次，共7 天泛昔洛韋250mg每日3 次共5 天 對(duì)于初發(fā)性生殖器皰疹，劑量不變，療程延長(zhǎng)至10 天,長(zhǎng)期抑制治療：對(duì)于發(fā)作頻繁的患者，可推薦長(zhǎng)期抑制療法，可選擇的方案包括：阿昔洛韋400mg，口

20、服2次/d泛昔洛韋250mg，口服2次/d伐昔洛韋500mg， 口服1次/d伐昔洛韋1.0g，口服1次/d,特殊人群的治療：新生兒皰疹：早期靜脈給子抗病毒治療，如阿昔洛韋（每次5mg/kg）每8小時(shí)l次，癥狀控制后，可考慮口服治療維持。妊娠皰疹：初發(fā)者，口服阿昔洛韋400mg每天3次，有嚴(yán)重并發(fā)癥者應(yīng)靜脈滴注阿昔洛韋。頻繁復(fù)發(fā)或新近感染的孕婦，可在妊娠最后4周給予連續(xù)口服阿昔洛韋。合并HIV感染者：與普通人群感染治療策略相同

21、，對(duì)發(fā)作次數(shù)頻繁者更主張長(zhǎng)期抑制療法，但應(yīng)關(guān)注耐藥性。,試劑盒選擇 國(guó)家規(guī)定臨床檢驗(yàn)室必須使用有注冊(cè)證的產(chǎn)品，并定期進(jìn)行試劑盒有效性檢測(cè),試劑盒評(píng)價(jià),根據(jù)該試劑臨床試驗(yàn)報(bào)告，了解其質(zhì)量水平；詢問試劑的組成，如原料來(lái)源等判斷試劑的優(yōu)劣；參考室間質(zhì)評(píng)的評(píng)價(jià)結(jié)果，了解試劑的質(zhì)控成績(jī)；根據(jù)權(quán)威部門發(fā)布的評(píng)價(jià)結(jié)果，了解試劑的質(zhì)量?jī)?yōu)劣。,標(biāo)本的采集和保存,臨床醫(yī)生應(yīng)遵循樣本采集原則，采集足夠的樣本量以反應(yīng)其真實(shí)的樣本信息。采樣過

22、程中應(yīng)避免血液污染樣本，以免與血清中的抗體結(jié)合而導(dǎo)致假陰性結(jié)果。取樣后如不能及時(shí)涂片，樣本需放入2~8℃冰箱保存。,1 涂片 將樣本輕緩?fù)磕ㄔ谳d玻片上，晾干； 避免反復(fù)涂抹拭子,2 固定使用固定劑固定5到10分鐘，自然晾干；常用固定劑：甲醇、丙酮或無(wú)水乙醇,操作流程,3 加樣用微量移液器吸取一定量試劑均勻滴加在玻片涂樣處，避免產(chǎn)生氣泡；每次加樣應(yīng)更換吸嘴，做到一份樣本一吸頭，避免發(fā)生交叉污染。,4 孵育置于3

23、7℃水浴鍋孵育，孵育時(shí)間20到30分鐘。避免試劑在玻片上干燥，否則將加重非特異性染色，且有可能造成假陽(yáng)性結(jié)果。,5 洗滌使用純凈水緩緩沖洗玻片多次，每次5秒鐘，自然晾干。 注意：勿用水流直接沖洗涂樣處。,6 觀察滴加無(wú)熒光鏡油后于100X熒光顯微鏡下觀察；觀察盡可能多的視野，以充分反應(yīng)樣本信息。注意：黃色熒光為非特異性染色或自發(fā)熒光。,試劑盒使用注意事項(xiàng),試劑盒應(yīng)避光冷藏；試劑盒在使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫；在有效期內(nèi)使用