分泌型免疫球蛋白A-ELISA檢測(cè)試劑盒的研制及臨床應(yīng)用研究.pdf

1、目的:
　　 1.研制酶聯(lián)免疫試劑盒以檢測(cè)外分泌液中分泌型免疫球蛋白A含量,并對(duì)對(duì)分泌型免疫球蛋白A含量ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行性能驗(yàn)證；2.應(yīng)用試劑盒對(duì)個(gè)人生活方式、環(huán)境因素和成年人粘膜免疫的關(guān)系進(jìn)行初步研究；3.應(yīng)用試劑盒對(duì)習(xí)慣性活動(dòng)量與sIgA的相關(guān)性進(jìn)行初步研究。
　　 方法:
　　 1.采用2種不同結(jié)合位點(diǎn)的抗體,抗SC抗體用于包被微孔板,另一種用于標(biāo)記HRP,優(yōu)化反應(yīng)條件和篩選試劑,建立雙抗體夾心EL

2、ISA檢測(cè)方法,配合底物組裝試劑盒；對(duì)分泌型免疫球蛋白含量ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行精密度、準(zhǔn)確度、靈敏度、穩(wěn)定性驗(yàn)證及干擾試驗(yàn)。
　　 2.對(duì)工作環(huán)境相似的30位男性和33位女性,使用標(biāo)準(zhǔn)問卷調(diào)查個(gè)人的生活方式、口腔衛(wèi)生、所處環(huán)境中空氣污染的狀況、心理因素、上呼吸道感染的頻率及持續(xù)時(shí)間。通過吐唾沫法采集靜息狀態(tài)下的混合唾液,用于測(cè)定唾液體積、唾液分泌率、sIgA濃度、sIgA分泌率。
　　 3.對(duì)63位成年人、58位大學(xué)

3、生和73位小學(xué)生通過問卷的方式進(jìn)行習(xí)慣活動(dòng)量的調(diào)查,通過吐唾沫法采集靜息狀態(tài)下的混合唾液,用于測(cè)定唾液體積、唾液分泌率、sIgA濃度、sIgA分泌率。
　　 結(jié)果:
　　 1.sIgA標(biāo)準(zhǔn)品的對(duì)數(shù)和相應(yīng)吸光度的對(duì)數(shù)在6.25～600ng/ml范圍內(nèi)呈線性關(guān)系；該試劑盒檢測(cè)限可達(dá)4.915 ng/ml,定量限可達(dá)6.25ng/ml,靈敏度符合要求；檢測(cè)低、中、高3個(gè)濃度的sIgA樣品,實(shí)驗(yàn)內(nèi)的變異系數(shù)分別是5.12％、4.

4、60％、5.48％,試驗(yàn)間的變異系數(shù)分別是8.39％、6.80％、7.36％；回收試驗(yàn)的回收率為95.93％-105.85％,準(zhǔn)確度符合要求;樣品基質(zhì)無明顯干擾。
　　 2.男性的唾液體積、唾液分泌率和sIgA分泌率高于女性,P值分別為0.023、0.023和0.033；口腔清潔分?jǐn)?shù)≧6組的slgA分泌率高于分?jǐn)?shù)<6組,P值為0.05；抑郁組URTI發(fā)病率及癥狀持續(xù)時(shí)間高于正常組,P值分別為0.035和0.016；飲食葷素均衡組

5、的唾液sIgA含量、sIgA分泌率明顯高于非均衡組,P值為別0.02和0.0001；多元逐步線性回歸顯示,sIgA分泌率與唾液體積、sIgA、飲食習(xí)慣、休閑運(yùn)動(dòng)量和總運(yùn)動(dòng)量相關(guān)。
　　 3.成年組男性唾液體積、唾液分泌率和sIgA分泌率高于女性組,P值分別為0.023、0.023和0.033；男性的工作HPA、運(yùn)動(dòng)HPA和總HPA均明顯高于女性,P值分別為0.0004、0.0008及0.0001。大學(xué)生組男性運(yùn)動(dòng)HPA和總HPA

6、高于女性,P值為0.0016和0.0176。小學(xué)生組女生sIgA高于男生,P值為0.03。大學(xué)生組和小學(xué)生組的sIgA含量和sIgA分泌率明顯高于成年組；成年組的工作活動(dòng)量高于另外兩組,三個(gè)組的體育運(yùn)動(dòng)量均有顯著差別,小學(xué)生組的空閑活動(dòng)量和總活動(dòng)量明顯高于成年組和大學(xué)生組。
　　 結(jié)論:
　　 1.該試劑盒具有較好的精密度、準(zhǔn)確度、特異性及穩(wěn)定性,可用于外分泌液中sIgA含量的測(cè)定。
　　 2.被動(dòng)吸煙和室內(nèi)空氣