臨床血液學檢驗造血檢驗基本方法細胞化學染色檢驗

1、1,第一章 造血與血細胞檢驗第七節(jié) 骨髓檢查二、細胞化學染色,2,普通染色,免疫細胞化學染色,細胞形態(tài)學檢驗技術(shù),,細胞化學染色,,,3,【細胞化學染色概述】細胞化學染色的概念,4,細胞化學染色的臨床應用細胞化學染色的基本步驟,幫助識別細胞了解細胞的生理狀態(tài)及功能輔助診斷及鑒別診斷血液系統(tǒng)疾病,取材：新鮮骨髓片或血片制片染色：固定、有色沉淀反應（顯色）、復染顯微鏡檢查：觀察染色是否成功，觀察目標細胞的染色結(jié)

2、果填寫報告單：定性（陽性/陰性）、半定量（陽性率/陽性積分/陽性程度）登記及存檔,5,6,7,復染的目的在于使各種細胞能顯示出來以便于觀察。選擇復染液的顏色應與有色沉淀的顏色有明顯的對比度，即能使細胞結(jié)構(gòu)顯示又能清楚地看出細胞化學染色結(jié)果,8,（一）用于貧血的細胞化學染色（鐵染色）『用于貧血的常規(guī)細胞化學染色』 外周血網(wǎng)織紅細胞計數(shù)（Ret/Retic/RC） 骨髓鐵染色,9,【復習：外周血網(wǎng)織紅細胞計數(shù)（Ret/Ret

3、ic/RC）】『問題』在瑞氏染色下，能否較準確地區(qū)別成熟紅細胞與未完全成熟的紅細胞（網(wǎng)織紅細胞）網(wǎng)織紅細胞計數(shù)有哪兩種方法？在手工操作法中，我們?nèi)旧坝^察的是哪種化學物質(zhì)網(wǎng)織紅細胞計數(shù)的參考值是多少？有什么臨床意義,手工活體染色法和儀器法,RNA,0.5％～1.5％,反映骨髓中紅系的造血情況，用于貧血的診斷、鑒別診斷及療效觀察,不能，未完全成熟的紅細胞在瑞氏染色下表現(xiàn)為嗜多色紅細胞,10,【骨髓鐵染色】染色原理及方法,貯存鐵

4、 鐵蛋白 含鐵血黃素,,11,標本片,12,正常血細胞的染色結(jié)果細胞外鐵：位于骨髓小粒內(nèi)或巨噬細胞胞質(zhì)內(nèi)（即幼紅細胞外）細胞內(nèi)鐵：位于幼紅細胞胞質(zhì)內(nèi)的鐵鐵粒幼紅細胞：胞質(zhì)中出現(xiàn)藍色鐵顆粒的幼紅細胞。計數(shù)100個中幼紅和晚幼紅細胞中鐵粒幼紅細胞的百分比即為細胞內(nèi)鐵陽性率鐵粒紅細胞：胞質(zhì)中出現(xiàn)藍色鐵顆粒的紅細胞環(huán)形鐵粒幼紅細胞：幼紅細胞胞質(zhì)中藍色顆粒6顆以上，圍繞核周1/2以上者,病理情況,13,14,細胞外鐵（＋＋＋＋）

5、,細胞外鐵（＋＋＋）,細胞外鐵（＋＋）,細胞外鐵（＋＋＋）,細胞外鐵（＋＋＋）,細胞外鐵（＋）,細胞外鐵（－）,15,鐵粒幼細胞,鐵粒幼細胞,幼紅細胞,環(huán)形鐵粒幼細胞、鐵粒紅細胞,16,參考值骨髓細胞外鐵：（+）~（++），約2/3人為（++），1/3人為（+）骨髓細胞內(nèi)鐵：鐵粒幼紅細胞的陽性率為19%~44%，以I型為主，少數(shù)為II型,17,臨床應用：用于貧血的診斷及鑒別診斷,18,隱性缺鐵缺鐵性貧血早期,缺鐵缺鐵性貧血,鐵轉(zhuǎn)

6、運或利用異常繼發(fā)性貧血,鐵負荷鐵粒幼細胞貧血巨幼細胞貧血再障MDS紅白血病,圖 貧血時鐵染色常見的四種情形,19,20,（二）中性粒細胞堿性磷酸酶染色（NAP染色） 染色原理及方法：Kaplow偶氮偶聯(lián)法,,成熟中性粒細胞胞質(zhì)中,21,標本片,22,正常血細胞的染色結(jié)果陽性反應呈棕黑色顆粒，定位于成熟中性粒細胞胞質(zhì)內(nèi)。其他細胞呈陰性油鏡下計數(shù)100個成熟中性粒細胞，記錄其陽性程度（－）、（＋）、（2＋）、（

7、3＋）、（4＋），分別記為0、1、2、3、4分。計算陽性細胞總數(shù)為陽性率，陽性細胞的分數(shù)總和為陽性積分,23,24,25,參考值：陽性率＜40％，陽性積分14～113。各實驗室之間可有較大差異，應建立各實驗室的參考值臨床應用NAP染色主要用于骨髓增生性腫瘤（MPN）的診斷與鑒別診斷。NAP是懷疑骨髓增生性腫瘤時應作的常規(guī)細胞化學染色慢粒NAP顯著減低，甚至為0，其他MPN為正?；蛟龈呗AP顯著減低，甚至為0，類白NAP顯著增

8、高鑒別其他疾病,26,圖 NAP染色（慢粒血片）,27,圖 NAP染色（類白血片）,28,（三）急性白血病形態(tài)學分型的細胞化學染色 『急性白血病細胞分型的常規(guī)細胞化學染色』過氧化物酶（POX）染色/蘇丹黑B（SBB）染色特異性酯酶（NAS-DCE）染色非特異性酯酶（α-NAE/ α-NBE/ NAS-DAE / ANAE等）染色過碘酸-雪夫（PAS）染色酸性磷酸酶（ACP）染色,29,『問題』在各系各階段血細

9、胞中，最難鑒別的細胞是什么細胞正常和一般疾病病人的骨髓片中可以看到原始細胞嗎在什么情況下，骨髓片中能看見大量的原始細胞如何鑒別原粒、原淋及原單？,原始細胞,原粒細胞＜2％，原紅＜1％，其他原始細胞罕見,急性白血病骨髓中原始細胞≥20％,MDS（RAEB）骨髓中原始細胞5～20％,細胞化學染色（一組）,30,過氧化物酶（POX）染色（1）染色方法及原理 復方聯(lián)苯胺法二氨基聯(lián)苯胺法四甲基聯(lián)苯胺法改良

10、Pereira法（碘化鉀法）,31,過氧化氫,四甲基聯(lián)苯胺,圖 POX染色原理（四甲基聯(lián)苯胺法）,試劑,試劑,32,（2）正常血細胞的染色反應染色成功的標志：成熟中性粒細胞為陽性反應各系細胞染色反應粒系：除早期原粒外，其余為陽性單核系：除早期原單外，其余為弱陽性淋巴系：陰性漿細胞系、紅系、巨核系：均呈陰性,33,34,35,36,【蘇丹黑B染色（SBB染色）】 （1）染色方法及原理 （2）正常血細胞的染

11、色反應 （3）臨床應用同POX染色。POX更特異，SBB更敏感,37,特異性酯酶染色（氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色，CE染色）（1）原理及方法,圖 氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色法原理,38,（2）正常血細胞的染色反應染色成功的標志：成熟中性粒細胞為陽性反應各系細胞的染色反應粒系：早期原粒為陰性，其余為陽性單核系：陰性淋巴系：陰性漿細胞系、紅系 、巨核系：均為陰性,39,40,非特異性酯酶染色（1）染色方法及原

12、理：需同時進行NaF抑制試驗,最特異,41,（2）各系血細胞的染色反應粒系：多為陰性，少數(shù)可呈陽性，陽性反應不能被NaF抑制（ α-NBE染色特異性較高，粒系為陰性 ）單核系：早期原單為陰性，其余為陽性，陽性反應可被NaF抑制淋巴系：多為陰性，少數(shù)可呈弱陽性，陽性反應不能被NaF抑制其他細胞,42,43,44,【酯酶雙染色】染色原理及方法：在同一張涂片上進行特異性酯酶染色和非特異酯酶染色 CE染色與α-NAE染色CE染色與

13、α-NBE染色各系血細胞的染色反應臨床應用：對AML-M4的診斷具有意義,45,過碘酸-雪夫反應（PAS染色，又稱糖原染色）（1）染色方法及原理細胞內(nèi)含有乙二醇基的糖類在過碘酸氧化作用下產(chǎn)生雙醛基，后者與雪夫（Schiff）染料作用，使無色品紅變?yōu)樽霞t色物質(zhì)沉積，定位于含有多糖成分的部位,46,（2）正常血細胞的染色反應染色成功的標志：成熟中性粒細胞為陽性反應各系血細胞的染色反應粒系：早期原粒陰性，其余為陽性，呈彌散狀陽性

14、單核系：早期原單陰性，其余為陽性，呈細顆粒狀陽性淋巴系：多數(shù)為陰性，少數(shù)為陽性，呈粗顆粒狀陽性或塊狀陽性紅系：陰性巨核系：陽性其他細胞,47,48,酸性磷酸酶（ACP）染色（1）染色方法及原理，同時做抗酒石酸酸性磷酸酶染色正常血細胞的染色結(jié)果：粒系、單核系、淋巴系、漿細胞系、巨核系、紅系等均呈陽性，抗酒石酸酸性磷酸酶染色均呈陰性臨床應用：主要用于毛細胞白血?。℉CL）的診斷及鑒別診斷，毛細胞為陽性或強陽性，不被酒石酸抑制

15、,49,本組細胞化學染色的臨床應用鑒別原粒、原單及原淋細胞鑒別急性白血病的類型急性白血病分類細胞化學染色鑒別急性白血病類型,示例,50,,51,,,原淋,原粒,原粒+原單,原單,骨髓中白血病性原始細胞20%,早幼粒,52,細胞化學染色,,53,【細胞化學染色鑒別急性白血病的類型】POX染色：最重要、首選的常規(guī)細胞化學染色，是鑒別急性淋巴細胞白血病和急粒髓細胞白血病的重要指標原始細胞陽性率≥3%為AML的M1～M5原始細胞陽

16、性率＜3%為ALL等 CE染色：能較特異地識別粒系細胞，用于輔助鑒別急性白血病的類型（M1、M2、M3、M4）非特異性酯酶染色及NaF抑制試驗：能較特異地識別單核系細胞，用于輔助鑒別急性白血病的類型（M4、M5）PAS染色：可以鑒別淋巴細胞與粒、單核細胞，用于輔助鑒別急性白血病的細胞類型。本法還用于鑒別幼紅細胞增生的性質(zhì),54,,55,,原始細胞：原淋,56,,原始細胞：原單+原粒,57,『作業(yè)』鑒別鐵染色結(jié)果的相關(guān)概念貯存鐵

17、鐵蛋白含鐵血黃素細胞外鐵細胞內(nèi)鐵鐵粒幼細胞環(huán)形鐵粒幼細胞鐵粒紅細胞,58,『作業(yè)』骨髓鐵染色的參考值？貧血時鐵染色常見以下四種結(jié)果，分別說明機體內(nèi)鐵處于哪種狀態(tài)外鐵減少，內(nèi)鐵正常外鐵減少或消失，內(nèi)鐵減少外鐵增高，內(nèi)鐵減少外鐵增高，內(nèi)鐵增高,59,『作業(yè)』POX染色、CE染色、非特異性酯酶染色及NaF抑制試驗、PAS染色這四種染色，粒系、單核系、淋巴系各階段細胞的結(jié)果是怎樣的？以列表的方式說明,60,『復習』怎